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tmoonday金虫 (小有名气)
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[求助]
简并引物PCR扩增问题 已有5人参与
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| 各位虫友好，敝人这段时间一直苦于基因克隆问题上，希望高人能够不吝赐教。请问各位大仙一般用简并引物扩增基因时的反应程序是什么啊，50ul体系各个成分的量一般怎么组合啊？谢谢啦 |
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hellolin
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9楼2014-08-30 21:24:51
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10X LA Buffer:5uL dNTP:4uL 上游:2uL 下游:2uL 模板：1uL LA Taq：0.5uL 加水至50uL 1、94℃ 2min 2、94℃ 30sec 3、54℃ 30sec 此温度根据自己的引物进行调节 4、72℃ 2min 延伸时间根据扩增的片段大小进行调节 5、72℃ 10min 2-4共35 cycles |
2楼2014-02-18 13:13:51
hellolin
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