应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 简并引物PCR扩增问题
91/1返回列表
查看: 2002  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

tmoonday

金虫 (小有名气)

[求助] 简并引物PCR扩增问题 已有5人参与

各位虫友好，敝人这段时间一直苦于基因克隆问题上，希望高人能够不吝赐教。请问各位大仙一般用简并引物扩增基因时的反应程序是什么啊，50ul体系各个成分的量一般怎么组合啊？谢谢啦
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
等一份缘分
1楼 2014-02-18 10:46:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
tmoonday: 金币+2, ★有帮助, 试试啊 2014-02-18 13:24:56
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-02-18 18:00:28
10X LA Buffer:5uL
dNTP:4uL
上游:2uL
下游:2uL
模板：1uL
LA Taq：0.5uL
加水至50uL

1、94℃ 2min
2、94℃ 30sec
3、54℃ 30sec    此温度根据自己的引物进行调节
4、72℃ 2min     延伸时间根据扩增的片段大小进行调节   
5、72℃ 10min
2-4共35 cycles
赞一下(2人) 回复此楼
植根于内心的修养；无需提醒的自觉；以约束为前提的自由；为别人着想的善良
2楼2014-02-18 13:13:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

YL1255968814
3楼2014-02-18 14:00:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hellolin

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流经验！ 2014-02-18 17:59:56
体系和普通PCR差不多，关键是退火温度，我们一般用40-45℃
赞一下(2人) 回复此楼
scienceguy
4楼2014-02-18 14:03:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

forrestgump

新虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-02-18 18:00:02
简并引物的退火温度最好用TD-PCR，再搞巢shiPCR
赞一下 回复此楼
5楼2014-02-18 14:16:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-02-18 18:00:15
你想用哪个酶进行扩增？？如果选定了那个酶，那么你买酶的时候就会带着说明书的，按上面的做。
扩增的时候我一般加甜菜碱（50ul的体系里面加5ul5M的甜菜碱），效果比较好。不加也可以。
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2014-02-18 16:59:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dameng198400

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by hellolin at 2014-02-18 14:03:17
体系和普通PCR差不多，关键是退火温度，我们一般用40-45℃

温度那么低的话，会不会二聚体太多？
赞一下 回复此楼
7楼2014-08-29 09:59:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

爱上鱼……

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我按平常的pcr条件就做出来了，结果没啥区别哦。
赞一下 回复此楼
懒病又犯了……
8楼2014-08-29 11:07:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hellolin

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by dameng198400 at 2014-08-29 09:59:15
温度那么低的话，会不会二聚体太多？...

不会的，扩出来没问题
赞一下 回复此楼
scienceguy
9楼2014-08-30 21:24:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 tmoonday 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿中科大070300化学，314分求调剂 +7 wakeluofu 2026-04-09 7/350 2026-04-09 10:50 by 三七七想上岸
[考研] 086000调剂 +4 十七sa 2026-04-07 4/200 2026-04-09 09:27 by 壹往無前
[考研] 材料调剂 +14 一样YWY 2026-04-06 14/700 2026-04-08 23:00 by 猪会飞
[考研] 324求调剂 +17 想上学求调 2026-04-03 17/850 2026-04-08 20:04 by 我减肥1
[考研] 283求调剂 +19 A child 2026-04-04 19/950 2026-04-08 14:26 by xingguangj
[考研] 312 化工或制药调剂 +9 小小墨123 2026-04-02 10/500 2026-04-08 10:30 by screening
[考研] 22408 调剂材料 +7 我叫ez 2026-04-06 8/400 2026-04-07 17:12 by 蓝云思雨
[考研] 生物学学硕求调剂：351分一志愿南京师范大学生物学专业 +6 …～、王…～ 2026-04-06 7/350 2026-04-06 18:54 by macy2011
[考研] 材料调剂 +5 小刘同学吖吖 2026-04-06 5/250 2026-04-06 18:34 by sherry_1901
[考研] （调剂）一志愿报考哈尔滨工业大学0857资源与环境专业378分考生 +7 狠狠加油 2026-04-05 8/400 2026-04-06 16:52 by momo皓
[考研] 一志愿哈尔滨工业大学085600英一数二337分求调剂 +12 lyz0427 2026-04-03 12/600 2026-04-06 06:37 by houyaoxu
[考研] 求调剂 +7 张.1 2026-04-05 7/350 2026-04-05 20:40 by 啵啵啵0119
[考研] 工科08-机械专硕-求调剂 +3 雷欧飞踢 2026-04-02 3/150 2026-04-05 18:49 by 蓝云思雨
[考研] 311分 22408 求调剂 +3 bing_bot 2026-04-03 3/150 2026-04-05 00:43 by chongya
[考研] 282电子信息0854专硕调剂 +4 202451007219 2026-04-02 6/300 2026-04-04 21:55 by laoshidan
[考研] 0835学硕299求调剂 08大类可接受 +5 useryy 2026-04-03 5/250 2026-04-04 20:07 by 蓝云思雨
[考研] 283分材料与化工求调剂 +29 罗KAKA 2026-04-02 29/1450 2026-04-03 23:56 by userper
[考研] 322求调剂 +4 FZAC123 2026-04-03 4/200 2026-04-03 20:55 by zhq0425
[考研] 266分，一志愿电气工程，本科材料，求材料专业调剂 +9 哇呼哼呼哼 2026-04-02 9/450 2026-04-03 12:05 by 1753564080
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +6 崔wj 2026-04-02 6/300 2026-04-03 10:19 by 蓝云思雨
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭