24小时热门版块排行榜    

查看: 11573  |  回复: 11
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

coolcdh

铁虫 (初入文坛)

[求助] pcr目的条带出现杂带,是什么原因? 已有6人参与

红线上条带应该是目的条带(目的基因引物是生工免费合成的)出现的位置(从左到右梯度50,52,54,55,56,58),但是目的基因杂带太多了。为了说明操作没有问题,图中红箭和圆圈头分别是我们课题组前期已经证实好用的另一基因和GAPDH内参,另一基因和内参出现的位置正确。Marker是1000bp,产物大小是362bp。
一,        操作应该没有问题,不然另一基因和内参也不会ok,
二,        是不是目的基因引物的问题呢?我的pcr条件是:预变性94度5min,(变性94度30s、退火梯度50,52,54,55,56,58,时间30s、延伸72度30s,35cycles),延伸72度10min
pcr目的条带出现杂带,是什么原因?
aa.jpg
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

沙漏 PCR相关

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yb19841014

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
看样子应该是引物的特异性不够高吧  如果是做克隆的话  回收一下就行了吧
4楼2014-01-19 21:21:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答

yyshpy007

禁虫 (正式写手)


感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励交流! 2014-01-19 19:34:13
本帖内容被屏蔽

2楼2014-01-19 00:09:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

半生一梦

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励交流! 2014-01-19 19:34:20
应该是引物特异性不够高啊 要不重新选一对引物
要不切胶回收连载体再转化感受态呗 就是稍麻烦
3楼2014-01-19 15:18:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangpeng227

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
可以上NCBI 用primer blast 看一下,是不是引物特异性不好?
5楼2014-01-19 23:04:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿中国海洋大学,生物学,301分,求调剂 +5 1孙悟空 2026-03-17 5/250 2026-03-19 18:03 by zcl123
[考研] 085601材料工程专硕求调剂 +10 慕寒mio 2026-03-16 10/500 2026-03-19 15:26 by 丁丁*
[考研] 085600材料与化工调剂 324分 +10 llllkkkhh 2026-03-18 12/600 2026-03-19 14:33 by llllkkkhh
[考研] 267一志愿南京工业大学0817化工求调剂 +10 SUICHILD 2026-03-12 10/500 2026-03-19 09:51 by Delta2012
[考研] 本科郑州大学物理学院,一志愿华科070200学硕,346求调剂 +4 我不是一根葱 2026-03-18 4/200 2026-03-19 09:11 by 浮云166
[考研] 材料专硕英一数二306 +5 z1z2z3879 2026-03-18 5/250 2026-03-19 07:43 by BruceLiu320
[考研] 一志愿武理材料305分求调剂 +5 想上岸的鲤鱼 2026-03-18 6/300 2026-03-18 17:53 by 无际的草原
[考研] 0854,计算机类招收调剂 +3 胡辣汤放糖 2026-03-15 6/300 2026-03-18 12:09 by 上岸上岸……..
[考研] 0703化学调剂 +3 妮妮ninicgb 2026-03-17 3/150 2026-03-18 10:29 by macy2011
[考博] 26博士申请 +3 1042136743 2026-03-17 3/150 2026-03-17 23:30 by 轻松不少随
[硕博家园] 湖北工业大学 生命科学与健康学院-课题组招收2026级食品/生物方向硕士 +3 1喜春8 2026-03-17 5/250 2026-03-17 17:18 by ber川cool子
[考研] 321求调剂 +5 大米饭! 2026-03-15 5/250 2026-03-16 16:33 by houyaoxu
[考研] 070303 总分349求调剂 +3 LJY9966 2026-03-15 5/250 2026-03-16 14:24 by xwxstudy
[考研] 326求调剂 +3 mlpqaz03 2026-03-15 3/150 2026-03-16 07:33 by Iveryant
[考研] 22408总分284求调剂 +3 InAspic 2026-03-13 3/150 2026-03-15 11:10 by zhq0425
[考研] 294求调剂 +3 Zys010410@ 2026-03-13 4/200 2026-03-15 10:59 by zhq0425
[考研] 297求调剂 +4 学海漂泊 2026-03-13 4/200 2026-03-14 11:51 by 热情沙漠
[考研] 266求调剂 +4 学员97LZgn 2026-03-13 4/200 2026-03-14 08:37 by zhukairuo
[考研] 求材料调剂 085600英一数二总分302 前三科235 精通机器学习 一志愿哈工大 +4 林yaxin 2026-03-12 4/200 2026-03-13 22:04 by 星空星月
[考研] 308求调剂 +3 是Lupa啊 2026-03-12 3/150 2026-03-13 14:30 by 求调剂zz
信息提示
请填处理意见