应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】PCR产物杂带很多，主带很弱。如何进行下一步实验？
91/1返回列表
查看: 2679  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

ap

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】PCR产物杂带很多，主带很弱。如何进行下一步实验？ 已有4人参与

在真菌基因组中，PCR一段6kb基因，PCR结果PCR产物杂带很多，主带很弱。
想得到这段基因。是否可以提高退火温度，以这次的PCR产物为模板，进行再一次的PCR？
如果切胶回收，主带很弱（几乎不可见），会不会得不到回收产物？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-07-22 13:55:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sunyongle1

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
ap(金币+10): 2010-07-22 16:06:40
如果你的引物可以的话，可以提高退火温度。另外不建议以pcr产物进行再次扩增，因为你的杂带大部分也是带有正确的引物序列。倒是可以试试切胶回收后再扩增，不过这样以来，你测序必然会有好多错的碱基。
还是直接切胶回收吧，看不见不见得就没有。只是量很少，但是可以直接连载体。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2010-07-22 13:59:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ap

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by sunyongle1 at 2010-07-22 13:59:04:
如果你的引物可以的话，可以提高退火温度。另外不建议以pcr产物进行再次扩增，因为你的杂带大部分也是带有正确的引物序列。倒是可以试试切胶回收后再扩增，不过这样以来，你测序必然会有好多错的碱基。
还是直接 ...

谢谢你的回答。
我的引物退火温度高了就没有PCR产物了。
我用的酶保真性比较高，切胶回收，再进行一次PCR，会有保真性的问题吗？
另外请问：切胶回收直接用EB染色可以吗？
赞一下 回复此楼
3楼2010-07-22 14:02:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sunyongle1

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
酶保真性比较高的话，问题不太大，多挑几个克隆就是了。但是6kb挺长的，即使保真性再好的酶也有可能错一两个碱基
切胶回收可以直接用EB染色
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2010-07-22 14:09:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ap

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by sunyongle1 at 2010-07-22 14:09:16:
酶保真性比较高的话，问题不太大，多挑几个克隆就是了。但是6kb挺长的，即使保真性再好的酶也有可能错一两个碱基
切胶回收可以直接用EB染色

谢谢，EB染色后，切胶回收，然后作为PCR模板，不会有问题吧？
赞一下 回复此楼
5楼2010-07-22 15:23:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sunyongle1

木虫 (正式写手)
不会有问题
回复此楼
6楼2010-07-22 15:26:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ap

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by sunyongle1 at 2010-07-22 15:26:43:
不会有问题

非常感谢！
回复此楼
7楼2010-07-22 16:05:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

带头大哥

铁虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
用高保真酶，PCR仪热启动。割胶时看不见的话，连上去基本也
赞一下(1人) 回复此楼
为家人为自己，努力
8楼2010-07-22 16:39:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ronghuan

银虫 (小有名气)
条带太弱的话，不建议胶回收，效果不好。建议还是调节下PCR反应条件
赞一下 回复此楼
9楼2010-07-22 20:32:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 ap 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗？ +3 349506619 2026-08-28 3/150 2026-08-29 10:49 by 木风9012
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已，这评审意见是按照杰青的条件评的吧？ +6 gouxfjh 2026-08-28 9/450 2026-08-29 09:59 by jklily
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 4/200 2026-08-29 09:48 by G6APbkg8SA6w
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 5/250 2026-08-29 09:39 by G6APbkg8SA6w
[基金申请] 2026年叶企孙基金 +4 bud_bud 2026-08-27 7/350 2026-08-29 07:23 by foolishmani
[博后之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 4/200 2026-08-29 05:45 by gy1nBQXYQJqL
[教师之家] 导师吐槽：我怎么摊上了这么个极品研究生！ +8 苏东坡二世 2026-08-23 8/400 2026-08-28 14:41 by lkforward
[基金申请] 基金不中，共勉 +11 eulota 2026-08-26 11/550 2026-08-28 14:22 by 火星超人xi
[基金申请] 怎么查啊 +6 huang1991js 2026-08-26 6/300 2026-08-28 08:42 by winsaint
[基金申请] 申请删除本帖 +6 lyz123lyz 2026-08-27 7/350 2026-08-27 17:31 by 宁静致远sy
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜？ 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 我不理解！ +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +9 炎黄贵胄 2026-08-22 10/500 2026-08-26 15:40 by semaglutide
[基金申请] 国际合作可查了，中了面上 (EPI+1)(金币+50) +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
[基金申请] 国合现在查不到了吗？ +10 chengyan1220 2026-08-24 20/1000 2026-08-26 08:57 by peasantsprig
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候，我看到了怒放的梅花。 (金币+10) +6 ziyangfang 2026-08-25 9/450 2026-08-25 20:26 by huagongfeihu
[基金申请] 明天应该可查了！？ +6 chengyan1220 2026-08-23 6/300 2026-08-25 19:45 by zfd97
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +9 图啦图啦 2026-08-24 10/500 2026-08-25 11:59 by 南海小哥
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭