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[交流] 【求助/交流】PCR产物杂带很多，主带很弱。如何进行下一步实验？已有4人参与

在真菌基因组中，PCR一段6kb基因，PCR结果PCR产物杂带很多，主带很弱。
想得到这段基因。是否可以提高退火温度，以这次的PCR产物为模板，进行再一次的PCR？
如果切胶回收，主带很弱（几乎不可见），会不会得不到回收产物？

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1楼2010-07-22 13:55:00

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sunyongle1

木虫 (正式写手)

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★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
ap(金币+10): 2010-07-22 16:06:40

如果你的引物可以的话，可以提高退火温度。另外不建议以pcr产物进行再次扩增，因为你的杂带大部分也是带有正确的引物序列。倒是可以试试切胶回收后再扩增，不过这样以来，你测序必然会有好多错的碱基。
还是直接切胶回收吧，看不见不见得就没有。只是量很少，但是可以直接连载体。

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2楼2010-07-22 13:59:04

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引用回帖:

Originally posted by sunyongle1 at 2010-07-22 13:59:04:
如果你的引物可以的话，可以提高退火温度。另外不建议以pcr产物进行再次扩增，因为你的杂带大部分也是带有正确的引物序列。倒是可以试试切胶回收后再扩增，不过这样以来，你测序必然会有好多错的碱基。
还是直接 ...

谢谢你的回答。
我的引物退火温度高了就没有PCR产物了。
我用的酶保真性比较高，切胶回收，再进行一次PCR，会有保真性的问题吗？
另外请问：切胶回收直接用EB染色可以吗？

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3楼2010-07-22 14:02:58

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