24小时热门版块排行榜    

查看: 2631  |  回复: 8

ap

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】PCR产物杂带很多,主带很弱。如何进行下一步实验? 已有4人参与

在真菌基因组中,PCR一段6kb基因,PCR结果PCR产物杂带很多,主带很弱。
想得到这段基因。是否可以提高退火温度,以这次的PCR产物为模板,进行再一次的PCR?
如果切胶回收,主带很弱(几乎不可见),会不会得不到回收产物?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sunyongle1

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
ap(金币+10): 2010-07-22 16:06:40
如果你的引物可以的话,可以提高退火温度。另外不建议以pcr产物进行再次扩增,因为你的杂带大部分也是带有正确的引物序列。倒是可以试试切胶回收后再扩增,不过这样以来,你测序必然会有好多错的碱基。
还是直接切胶回收吧,看不见不见得就没有。只是量很少,但是可以直接连载体。
2楼2010-07-22 13:59:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ap

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by sunyongle1 at 2010-07-22 13:59:04:
如果你的引物可以的话,可以提高退火温度。另外不建议以pcr产物进行再次扩增,因为你的杂带大部分也是带有正确的引物序列。倒是可以试试切胶回收后再扩增,不过这样以来,你测序必然会有好多错的碱基。
还是直接 ...

谢谢你的回答。
我的引物退火温度高了就没有PCR产物了。
我用的酶保真性比较高,切胶回收,再进行一次PCR,会有保真性的问题吗?
另外请问:切胶回收直接用EB染色可以吗?
3楼2010-07-22 14:02:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sunyongle1

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
酶保真性比较高的话,问题不太大,多挑几个克隆就是了。但是6kb挺长的,即使保真性再好的酶也有可能错一两个碱基
切胶回收可以直接用EB染色
4楼2010-07-22 14:09:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ap

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by sunyongle1 at 2010-07-22 14:09:16:
酶保真性比较高的话,问题不太大,多挑几个克隆就是了。但是6kb挺长的,即使保真性再好的酶也有可能错一两个碱基
切胶回收可以直接用EB染色

谢谢,EB染色后,切胶回收,然后作为PCR模板,不会有问题吧?
5楼2010-07-22 15:23:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sunyongle1

木虫 (正式写手)

不会有问题
6楼2010-07-22 15:26:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ap

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by sunyongle1 at 2010-07-22 15:26:43:
不会有问题

非常感谢!
7楼2010-07-22 16:05:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

带头大哥

铁虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
用高保真酶,PCR仪热启动。割胶时看不见的话,连上去基本也
为家人为自己,努力
8楼2010-07-22 16:39:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ronghuan

银虫 (小有名气)

条带太弱的话,不建议胶回收,效果不好。建议还是调节下PCR反应条件
9楼2010-07-22 20:32:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 ap 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +5 启萌科技 2026-08-12 16/800 2026-08-14 16:02 by 启萌科技
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +8 布布和一二 2026-08-10 11/550 2026-08-14 14:58 by Equinoxhua
[基金申请] 有时候,自然基金真的不能太认真 (我的申报经验) +6 majunge000 2026-08-11 8/400 2026-08-14 14:44 by 医学老男孩
[基金申请] 好奇怪的filecode +6 布布和一二 2026-08-08 7/350 2026-08-14 13:38 by Equinoxhua
[硕博家园] 请教兼职经验 +3 是阿文鸭 2026-08-09 3/150 2026-08-14 12:07 by HER12025
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +9 majunge000 2026-08-10 12/600 2026-08-13 23:20 by iwuli
[文学芳草园] 阿姨 +4 汪汪锅 2026-08-09 4/200 2026-08-13 19:43 by arzu_hma
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +3 yuleib84 2026-08-11 3/150 2026-08-11 21:53 by jnhyjjm
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +9 布布和一二 2026-08-08 9/450 2026-08-10 11:22 by xxxx2020
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +11 布布和一二 2026-08-08 22/1100 2026-08-10 11:10 by wmfsnow
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
[基金申请] 关于filecode,很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制,评价高的钱多评价低的钱少,但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
信息提示
请填处理意见