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[求助] 我想做两个基因的融合克隆表达，怎么设计引物使两个基因融合啊？已有2人参与

我想做两个基因的融合克隆表达，怎么设计引物使两个基因融合啊？是不是需要两个引物设计一个相同的酶切位点，先把两基因扩增出来，再双酶切，用T4连接，就能成功融合了？？？谢谢各位大神了

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1楼 2014-01-14 16:49:58

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lvbobo823

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【答案】应助回帖

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sckcf: 金币+4, ★★★★★最佳答案, 谢谢了 2014-01-14 17:21:25
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-01-15 08:30:20

融合表达首先你确定哪个基因在前克隆这个基因片段时就要去掉终止子，必须保证后基因读码框与前基因一致。两个基因融合一块可以有两种方式一是你所说的添加酶切位点，但是麻烦些，你需要先克隆一个片段到某个中间载体上，酶切再连另一载体，当然双片段连接也可以但成功率较低。另一方法是做个overlap PCR直接克隆这两个片段（引物上有共有序列）在一块。一定要验证你的编码框不能移位。