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tankleiming

新虫 (小有名气)

[求助] 急急急,如何设计一个已知基因的引物,克隆基因使原核表达,怒送金币

现在是刚刚搞到分子这边,许多东西不是很懂,问题如下


我们老师让设计一种细菌外膜蛋白的的基因的引物,用来与那和表达,我不知道怎么做
1.  已经找到这个基因的完整的cds,大概1000bp
2.怎么找到两边的序列来设计引物,用pcr吧这个基因扩增出来?
3. 是不是在引物里面加酶切位点?有什么要求吗
                                                                     


基本就是这些,谢谢大家了,很急啊
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zhenwuhuang

至尊木虫 (文学泰斗)

【答案】应助回帖

★
感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2013-12-01 14:50:55
如何通过已知序列设计引物获得该基因的全序列?
http://muchong.com/html/201209/4846230.html
【求助】已知一段基因序列,如何设计引物测序
http://www.dxy.cn/bbs/topic/14851632
2楼2013-12-01 14:01:00
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普通回帖

zhenwuhuang

至尊木虫 (文学泰斗)

【答案】应助回帖

★
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2013-12-01 14:51:03
要P一段基因全长,已知CDS,怎么设计引物啊?
http://muchong.com/html/201201/4055754.html
3楼2013-12-01 14:02:08
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deguohan

至尊木虫 (职业作家)

教授、博/硕导

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ...
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-12-01 19:20:07
tankleiming: 金币+50, ★★★很有帮助 2013-12-05 09:45:31
要P一段基因全长,已知CDS,怎么设计引物啊?http://muchong.com/html/201201/4055754.html  
还可以直接在两头抄写一段序列,5‘直接抄,3’反向互补,2个序列退货温度差不多即可!!!!!多设计几对
天道酬勤,厚德载物
4楼2013-12-01 15:05:36
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貓貓

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你可以邮件锐博,他会免费帮你设计,然后你再核对一下。
如果自己设计的话,首先要在已知序列上找18-25bp,这是你的引物长度,目的条带在100-200bp之间,引物的3‘端不要出现连续的A(大于等于3),GC比要在45%-55%之间
5楼2013-12-02 09:07:09
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jennifermatt

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-03-28 17:08:52
直接从头到尾的对齐设计,加保护碱基,酶切位点,起始密码子,对应的引物序列即可。选酶切位点时,注意可以共酶切就行。
求是
6楼2013-12-03 11:04:33
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海洋圈圈

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-03-28 17:09:02
做原核表达的话最好软件分析下蛋白质疏水性
7楼2013-12-03 14:02:43
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grape_vine

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我觉得你应该找周围会做得人,问一下基本中就弄明白了!
8楼2013-12-03 21:26:40
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三蛰

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
最基本的,可以在各种论坛的各种板块找到,自己找一找
我不会!
9楼2013-12-04 08:45:08
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zilinweizhu

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
primer 5引物设计软件设计引物就行了,引物两端一般要加上酶切位点,方便后续的操作
10楼2013-12-04 12:39:03
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