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请问克隆表达时目的片段前多加了KOZAK序列会影响融合蛋白表达吗？
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我想把一个基因克隆到含有FLAG标签的载体上，表达出带标签的融合蛋白， 但设计引物时在目的片段前多加了一段KOZAK序列GCCACC，听说KOZAK序列是 翻译起始位点，那么克隆上去后会影响融合蛋白表达吗？ |
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2楼2013-03-30 23:59:59
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【答案】应助回帖
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kx444555: 金币+2, 很详细 2013-06-13 19:31:04
kx444555: 金币+2, 很详细 2013-06-13 19:31:04
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Kozak序列和IRES序列都可以行使翻译起始功能，但它们是有质的区别的。 Kozak序列是位于真核生物mRNA 5’端帽子结构后面的一段核酸序列，通常是ACCACCATGG，它可以与翻译起始因子结合而介导含有5’帽子结构的mRNA翻译起始。对应于原核生物的SD序列。 IRES（（internal ribosome entry site）则是一些微小RNA病毒含有的能在真核细胞内模拟5’帽子结构行使翻译起始作用的特殊序列。 IRES序列常用于多顺反子基因表达。例如，在目的基因之后插入IRES序列，后面是选择标记基因，这样转录出来的mRNA就可以同时表达两种蛋白，选择标记基因翻译是通过不依赖于5’帽子的作用进行的. 注意最后一句话。 不知道你的问题是否解决了？ |
3楼2013-05-14 10:42:46
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5