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chenxiang29

银虫 (正式写手)

[求助] 表达已知序列,有必要做TA克隆吗

我想表达已知序列蛋白,有必要做TA克隆吗?可不可以直接连接到表达质粒上进行发酵表达呢?
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muyanshuang

木虫 (正式写手)

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有必要做TA克隆,进行序列测序,确定序列的正确性,确定没有任何突变。
有时候看似走弯路,实际上是在节省时间。
4楼2012-11-01 09:34:05
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hippo_li

金虫 (小有名气)

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★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
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chenxiang29: 金币+10, ★★★很有帮助, 觉得这个不错呀 2012-11-01 17:21:40
可以不做TA克隆,直接连载体,但是无论是做TA克隆还是直接连载体,都要测序以保证序列的准确性。
我一般是直接克隆到表达载体然后转DH5α,送测序确定正确后再提质粒转表达宿主表达,这样做表达质粒在DH5α也能稳定保存。
7楼2012-11-01 11:58:28
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titus0805

铁虫 (小有名气)

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★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
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chenxiang29: 金币+10, ★★★很有帮助, 嗯,我想试试直接连接表达质粒,然后测序 2012-11-01 17:26:16
可以,不过要保证表达载体能够正常测序,不然直接pcr出来的序列可没有保障,一般连TA载体也就是用来测序的
8楼2012-11-01 12:45:19
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普通回帖

laojiu9878

至尊木虫 (知名作家)

九牛

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可以,只是操作不好的话,连不上,没有质粒序列保存麻烦
但愿人长久
2楼2012-11-01 09:31:05
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szylnl

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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TA克隆只是一个过程,它能保证你酶切时彻底,也可不做。

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用百分之百的努力去做每件事
3楼2012-11-01 09:32:25
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gwd0312

木虫 (正式写手)

“无冕之王”

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很有必要做TA克隆,有些事是不能省的。
持之以恒、永不放弃!
5楼2012-11-01 10:46:35
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静安jingan

铁杆木虫 (职业作家)

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还是做一下,最近有一师姐实验做到最后了,才发现有突变,还要重来
让复杂的事情变简单,简单的事情更简单
6楼2012-11-01 11:18:05
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huangguoqing

木虫 (正式写手)

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个人建议,仅供参考!
建议最好做个TA克隆,然后测序鉴定,确定扩增出来的片段没有发生突变。如果只是对PCR产物进行测序,在测序起始处的几十个碱基是不准确的,如果发生了突变,你还继续做了,那就悲剧了。测序确定了之后,也更能确定你表达的时候酶切是否完全。
9楼2012-11-01 13:37:11
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1586165532

至尊木虫 (文坛精英)

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当让要,要不以后麻烦了就
10楼2012-11-01 14:14:24
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