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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 表达已知序列，有必要做TA克隆吗
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chenxiang29

银虫 (正式写手)

[求助] 表达已知序列，有必要做TA克隆吗

我想表达已知序列蛋白，有必要做TA克隆吗？可不可以直接连接到表达质粒上进行发酵表达呢？
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smile to the world
1楼 2012-11-01 09:14:24
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

muyanshuang

木虫 (正式写手)

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有必要做TA克隆，进行序列测序，确定序列的正确性，确定没有任何突变。
有时候看似走弯路，实际上是在节省时间。
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4楼2012-11-01 09:34:05
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hippo_li

金虫 (小有名气)

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chenxiang29: 金币+10, ★★★很有帮助, 觉得这个不错呀 2012-11-01 17:21:40
可以不做TA克隆，直接连载体，但是无论是做TA克隆还是直接连载体，都要测序以保证序列的准确性。
我一般是直接克隆到表达载体然后转DH5α，送测序确定正确后再提质粒转表达宿主表达，这样做表达质粒在DH5α也能稳定保存。
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7楼2012-11-01 11:58:28
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titus0805

铁虫 (小有名气)

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chenxiang29: 金币+10, ★★★很有帮助, 嗯，我想试试直接连接表达质粒，然后测序 2012-11-01 17:26:16
可以，不过要保证表达载体能够正常测序，不然直接pcr出来的序列可没有保障，一般连TA载体也就是用来测序的
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8楼2012-11-01 12:45:19
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laojiu9878

至尊木虫 (文坛精英)

九牛

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可以，只是操作不好的话，连不上，没有质粒序列保存麻烦
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但愿人长久
2楼2012-11-01 09:31:05
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szylnl

银虫 (小有名气)

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TA克隆只是一个过程，它能保证你酶切时彻底，也可不做。
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chenxiang29
用百分之百的努力去做每件事
3楼2012-11-01 09:32:25
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gwd0312

木虫 (正式写手)

“无冕之王”

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很有必要做TA克隆，有些事是不能省的。
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持之以恒、永不放弃！
5楼2012-11-01 10:46:35
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静安jingan

铁杆木虫 (职业作家)

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还是做一下，最近有一师姐实验做到最后了，才发现有突变，还要重来
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让复杂的事情变简单，简单的事情更简单
6楼2012-11-01 11:18:05
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huangguoqing

木虫 (正式写手)

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个人建议，仅供参考！
建议最好做个TA克隆，然后测序鉴定，确定扩增出来的片段没有发生突变。如果只是对PCR产物进行测序，在测序起始处的几十个碱基是不准确的，如果发生了突变，你还继续做了，那就悲剧了。测序确定了之后，也更能确定你表达的时候酶切是否完全。
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9楼2012-11-01 13:37:11
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1586165532

至尊木虫 (文坛精英)

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当让要，要不以后麻烦了就
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10楼2012-11-01 14:14:24
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