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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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chenxiang29

银虫 (正式写手)

[求助] 表达已知序列,有必要做TA克隆吗

我想表达已知序列蛋白,有必要做TA克隆吗?可不可以直接连接到表达质粒上进行发酵表达呢?
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huangguoqing

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
个人建议,仅供参考!
建议最好做个TA克隆,然后测序鉴定,确定扩增出来的片段没有发生突变。如果只是对PCR产物进行测序,在测序起始处的几十个碱基是不准确的,如果发生了突变,你还继续做了,那就悲剧了。测序确定了之后,也更能确定你表达的时候酶切是否完全。
9楼2012-11-01 13:37:11
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laojiu9878

至尊木虫 (知名作家)

九牛

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
可以,只是操作不好的话,连不上,没有质粒序列保存麻烦
但愿人长久
2楼2012-11-01 09:31:05
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szylnl

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
TA克隆只是一个过程,它能保证你酶切时彻底,也可不做。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

用百分之百的努力去做每件事
3楼2012-11-01 09:32:25
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muyanshuang

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
有必要做TA克隆,进行序列测序,确定序列的正确性,确定没有任何突变。
有时候看似走弯路,实际上是在节省时间。
4楼2012-11-01 09:34:05
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