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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 表达已知序列，有必要做TA克隆吗
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chenxiang29

银虫 (正式写手)

[求助] 表达已知序列，有必要做TA克隆吗

我想表达已知序列蛋白，有必要做TA克隆吗？可不可以直接连接到表达质粒上进行发酵表达呢？
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smile to the world
1楼 2012-11-01 09:14:24
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huangguoqing

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
个人建议，仅供参考！
建议最好做个TA克隆，然后测序鉴定，确定扩增出来的片段没有发生突变。如果只是对PCR产物进行测序，在测序起始处的几十个碱基是不准确的，如果发生了突变，你还继续做了，那就悲剧了。测序确定了之后，也更能确定你表达的时候酶切是否完全。
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9楼2012-11-01 13:37:11
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laojiu9878

至尊木虫 (文坛精英)

九牛

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可以，只是操作不好的话，连不上，没有质粒序列保存麻烦
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但愿人长久
2楼2012-11-01 09:31:05
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szylnl

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
TA克隆只是一个过程，它能保证你酶切时彻底，也可不做。
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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

chenxiang29
用百分之百的努力去做每件事
3楼2012-11-01 09:32:25
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muyanshuang

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
有必要做TA克隆，进行序列测序，确定序列的正确性，确定没有任何突变。
有时候看似走弯路，实际上是在节省时间。
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4楼2012-11-01 09:34:05
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