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潘蕾

新虫 (初入文坛)

[求助] DKK4基因的克隆，我现在

Sample Text
各位大神，请问有谁做过或者正在研究DKK4基因，我现在要克隆DKK4的序列，序列信息是参考人的DKK4，模板是家兔RNA反转录的cDNA,但是一直都P不出来，换了几对引物也没有结果。恳请帮助。谢谢，
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1楼 2013-11-16 10:08:19
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-11-17 12:36:08
你是想克隆人的DKK4基因还是家兔的DKK4基因序列

如果是人的，你应该用人的cDNA做模板

如果是克隆兔的，你应该设计兼并引物进行PCR，而不是简单的根据人的序列设计引物来扩增兔的序列
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2013-11-16 18:10:49
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潘蕾

新虫 (初入文坛)
家兔的。兼并引物？！这个我还不了解，我去查查。谢谢您哦，

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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3楼2013-11-17 00:13:45
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soarrow

铁杆木虫 (正式写手)

酱油歪楼党
★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-11-17 12:36:13
兔的DKK4基因序列在NCBI可以查到，去检索、下载下来再设计RT-PCR的引物好了。
还可以把兔的和人的比较一下，其它还有猪、鼠什么的也可以比较一下，选择跟人最接近的来做可能更好
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4楼2013-11-17 11:37:10
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潘蕾

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by soarrow at 2013-11-17 11:37:10
兔的DKK4基因序列在NCBI可以查到，去检索、下载下来再设计RT-PCR的引物好了。
还可以把兔的和人的比较一下，其它还有猪、鼠什么的也可以比较一下，选择跟人最接近的来做可能更好


兔的DKK4基因序列在NCBI可以查不到啊？请问您是怎么查到的？新人求指导！
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5楼2013-11-19 08:46:08
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sinoer

铜虫 (小有名气)
如果不确定的序列，那么你需要建库了
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6楼2013-11-19 09:23:38
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soarrow

铁杆木虫 (正式写手)

酱油歪楼党
引用回帖:
5楼: Originally posted by 潘蕾 at 2013-11-19 08:46:08
兔的DKK4基因序列在NCBI可以查不到啊？请问您是怎么查到的？新人求指导！...

hehe,,,看看这两个链接，我当时没细看，也就是粗略瞅了一下，你看看吧，希望有所帮助

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/protein/291409033

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/291409032
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7楼2013-11-19 13:07:45
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潘蕾

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by soarrow at 2013-11-19 13:07:45
hehe,,,看看这两个链接，我当时没细看，也就是粗略瞅了一下，你看看吧，希望有所帮助

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/protein/291409033

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/291409032

...

谢谢，不过这个跟我要的基因不是同一个！
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8楼2013-11-26 15:13:28
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