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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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答案24

木虫 (初入文坛)

高中

[求助] 求助:内参引物的问题 已有1人参与

本人新手,刚刚做荧光半定量,确定内参引物(退火温度是58.4)的循环次数时,用的是混合样品(双平行),做了23  25   28的循环梯度,单独跑电泳。条带是这样的(1)。我就选择了25个循环次数,用六个不同的组织做荧光半定量(前面是目的基因,后六个是内参引物)。出现了内参基因的亮度不恒定,有弱有强(图2),又跑了几次电泳,甚至内参跑不出来(图三)。不知道为什么啊     求大侠指点迷津
求助:内参引物的问题
图2.jpg


求助:内参引物的问题-1
图一.jpg


求助:内参引物的问题-2
图3.jpg
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
答案24(kx444555代发): 金币+4, 鼓励交流 2014-01-03 09:45:06
不同基因的循环数目需要分别摸索,不能只用一个。同一基因,考虑的样品上调和下调的可能,实验时最好采用不同的循环数目,确保所有样品得到理想的扩增。实话说半定量确实有些麻烦,现在荧光定量已经相当普及,最好直接上荧光定量。
2楼2014-01-03 00:07:47
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