版块导航: 正在加载中...

登录注册

应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜

返回列表

答案24

木虫 (初入文坛)

高中

应助: 1 (幼儿园)
金币: 3881.3
散金: 55
红花: 1
帖子: 41
在线: 33.4小时
虫号: 1720698
注册: 2012-03-27
专业: 水产生物遗传育种学

[求助] 求助：内参引物的问题已有1人参与

本人新手，刚刚做荧光半定量，确定内参引物（退火温度是58.4）的循环次数时，用的是混合样品（双平行），做了23 25 28的循环梯度，单独跑电泳。条带是这样的（1）。我就选择了25个循环次数，用六个不同的组织做荧光半定量（前面是目的基因，后六个是内参引物）。出现了内参基因的亮度不恒定，有弱有强（图2），又跑了几次电泳，甚至内参跑不出来（图三）。不知道为什么啊求大侠指点迷津

图2.jpg

图一.jpg

图3.jpg

回复此楼

» 猜你喜欢

Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析已经有0人回复
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析已经有0人回复
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费? 已经有218人回复
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析已经有0人回复
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析已经有0人回复
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点已经有0人回复
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂已经有0人回复
氢氧化钾活化操作已经有18人回复
散金已经有68人回复
生物质超级电容器已经有0人回复

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

关于一对引物同时扩增多个不同基因的问题已经有10人回复
请问设计引物前为什么要进行同源性比较？？已经有15人回复
QPCR 玉米低磷胁迫内参的问题已经有3人回复
如何利用文献找到的引物查找目的模板？已经有8人回复
荧光定量pcr,以及内参基因的选择。已经有4人回复
关于qRT-PCR内参基因的验证已经有10人回复
关于基因测序引物的设计已经有7人回复
荧光定量PCR设计了三对引物了，都扩增不出来，郁闷啊已经有4人回复
相对定量内参基因循环数的问题已经有18人回复
荧光定量内参基因引物的设计已经有6人回复
Realtime PCR 内参与目的基因问题已经有11人回复
最近RT-PCR能够出来内参，却没有目的条带，请各位高手帮忙已经有9人回复
内参引物和目的基因的引物可以放在同一个PCR管中反应吗？？已经有5人回复
关于PCR中buffer的更换问题已经有7人回复
发现了beta actin作为内参的一个漏洞已经有25人回复
求助！关于RT-PCR的问题！已经有20人回复
求助PCR反应参数设置已经有9人回复
向RTPCR高手求助，关于RTPCR的空白对照问题已经有9人回复
ＲＴ－ＰＣＲ问题求助已经有18人回复
【求助/交流】实时定量内参无条带！已经有7人回复
【求助/交流】RT-PCR ，内参在哪个步骤添加以及marker何时使用及确定？谢谢已经有14人回复
【求助/交流】请教个关于inverse PCR的问题已经有21人回复
【求助/交流】关于pcr内参b-actine的一个问题已经有5人回复
【求助/交流】目的基因PCR后电泳出现多条带已经有7人回复
【求助/交流】RTPCR 内参已经有4人回复

认真仔细乐观的对待每一天

1楼 2014-01-02 21:06:26

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

MolEPI: 10
应助: 1662 (讲师)
金币: 8693.8
红花: 72
帖子: 3516
在线: 456小时
虫号: 1614001
注册: 2012-02-13
专业: 生物化学

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
答案24(kx444555代发): 金币+4, 鼓励交流 2014-01-03 09:45:06

不同基因的循环数目需要分别摸索，不能只用一个。同一基因，考虑的样品上调和下调的可能，实验时最好采用不同的循环数目，确保所有样品得到理想的扩增。实话说半定量确实有些麻烦，现在荧光定量已经相当普及，最好直接上荧光定量。

赞一下