24小时热门版块排行榜    

查看: 1368  |  回复: 9
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

永远一片天

新虫 (正式写手)

[求助] 求双酶切连接、载体构建等信息~ 已有2人参与

最近学习双酶切,但太泛了,完全没有头绪,如何在引物两端加酶切位点也一头雾水,如何选择载体?如何构建载体??等等
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

实验求助

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sxxuan

金虫 (著名写手)

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-01-29 17:39:50
引用回帖:
5楼: Originally posted by 永远一片天 at 2014-01-03 22:00:16
想问一下如何在引物两端加入保护碱基?...

网上有个表是关于怎么添加保护碱基的,不同酶切位点选择不同的保护碱基有利于增加酶切效率。上网一搜就出来了。然后设计引物的时候分别在酶切位点前面增加就好

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

你的日子如何,你的力量也必如何!
7楼2014-01-06 14:10:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-01-02 12:09:28
永远一片天: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-01-03 21:52:51
双酶切不应该觉得太麻烦,就是把两种酶在合适的Buffer里工作就可以了。引物前加酶切位点也很好弄,把自己需要用的酶切序列添加到引物前段保证引物匹配序列不低于15bp就好。同时在酶切位点前加几个保护碱基。载体选择根据你的需要定,有合适的酶切位点。构建也一样根据需要。
hehe
2楼2014-01-02 08:57:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sxxuan

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-01-02 12:09:35
永远一片天: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-01-03 21:53:01
你可以看看pET原核表达手册,里面讲了很多理论知识,虽然主要是原核表达载体方面的构建,但也可以满足你的需求。
另外不知道你做双酶切构建载体是用于哪一方面,所以是不能具体地和你讲怎么做到。不管怎样,选择酶切位点或者载体构建,都是和你的实验目的以及序列相关。酶切位点不能是目的序列里面有的,做上下游加入酶切位点的方向要与载体的方向一致。
很多酶的厂家,例如takara/neb/fermentas等网站上都有相关的技术手册,可以参考。
你的日子如何,你的力量也必如何!
3楼2014-01-02 09:28:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

永远一片天

新虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by lvbobo823 at 2014-01-02 08:57:09
双酶切不应该觉得太麻烦,就是把两种酶在合适的Buffer里工作就可以了。引物前加酶切位点也很好弄,把自己需要用的酶切序列添加到引物前段保证引物匹配序列不低于15bp就好。同时在酶切位点前加几个保护碱基。载体选择 ...

你好,我想请问一下如何在引物两端加保护碱基呢?酶切位点的两端都加吗?网上有许多保护碱基 的汇总,但不知道是否可靠?
4楼2014-01-03 21:59:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0857调剂 +4 一ll半 2026-02-28 5/250 2026-03-02 02:33 by 908055542
[考研] 材料化工调剂 +12 今夏不夏 2026-03-01 13/650 2026-03-01 23:32 by L135790
[考研] 265分求调剂不调专业和学校有行学上就 +6 礼堂丁真258 2026-02-28 8/400 2026-03-01 22:50 by jian_
[考研] 272求调剂 +6 材紫有化 2026-02-28 6/300 2026-03-01 18:58 by 18137688336
[考研] 材料学调剂 +9 提神豆沙包 2026-02-28 11/550 2026-03-01 18:15 by ms629
[考研] 328求调剂 +3 aaadim 2026-03-01 5/250 2026-03-01 17:29 by njzyff
[考研] 化工专硕348,一志愿985求调剂 +5 弗格个 2026-02-28 8/400 2026-03-01 17:25 by sunny81
[考研] 281求调剂 +4 2026计算机_诚心 2026-03-01 7/350 2026-03-01 17:20 by 2026计算机_诚心
[考研] 化工专硕342,一志愿大连理工大学,求调剂 +3 kyf化工 2026-02-28 4/200 2026-03-01 16:49 by yywzz
[考研] 285求调剂 +8 满头大汗的学生 2026-02-28 8/400 2026-03-01 16:47 by caszguilin
[考研] 材料工程274求调剂 +3 Lilithan 2026-03-01 3/150 2026-03-01 14:58 by ms629
[考研] 求调剂 +6 repeatt?t 2026-02-28 6/300 2026-03-01 14:37 by Sakura绘
[考研] 课题组接收材料类调剂研究生 +3 gaoxiaoniuma 2026-02-28 4/200 2026-03-01 14:30 by jjj三跨
[考研] 调剂 +3 简木ChuFront 2026-02-28 3/150 2026-03-01 11:46 by 王伟要上岸啊
[考研] 317一志愿华南理工电气工程求调剂 +6 Soliloquy_Q 2026-02-28 11/550 2026-03-01 11:14 by 歌liekkas
[考研] 311求调剂 +9 南迦720 2026-02-28 10/500 2026-03-01 10:55 by sunny81
[硕博家园] 2025届双非化工硕士毕业,申博 +3 更多的是 2026-02-27 4/200 2026-03-01 10:04 by ztg729
[论文投稿] Optics letters投稿被拒求助 30+3 luckyry 2026-02-26 4/200 2026-03-01 09:06 by babero
[考研] 264求调剂 +3 巴拉巴拉根556 2026-02-28 3/150 2026-02-28 21:31 by gaoxiaoniuma
[高分子] 求环氧树脂研发1名 +3 孙xc 2026-02-25 11/550 2026-02-28 16:57 by ichall
信息提示
请填处理意见