24小时热门版块排行榜    

查看: 1403  |  回复: 9
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

永远一片天

新虫 (正式写手)

[求助] 求双酶切连接、载体构建等信息~ 已有2人参与

最近学习双酶切,但太泛了,完全没有头绪,如何在引物两端加酶切位点也一头雾水,如何选择载体?如何构建载体??等等
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

实验求助

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sxxuan

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-01-02 12:09:35
永远一片天: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-01-03 21:53:01
你可以看看pET原核表达手册,里面讲了很多理论知识,虽然主要是原核表达载体方面的构建,但也可以满足你的需求。
另外不知道你做双酶切构建载体是用于哪一方面,所以是不能具体地和你讲怎么做到。不管怎样,选择酶切位点或者载体构建,都是和你的实验目的以及序列相关。酶切位点不能是目的序列里面有的,做上下游加入酶切位点的方向要与载体的方向一致。
很多酶的厂家,例如takara/neb/fermentas等网站上都有相关的技术手册,可以参考。
你的日子如何,你的力量也必如何!
3楼2014-01-02 09:28:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-01-02 12:09:28
永远一片天: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-01-03 21:52:51
双酶切不应该觉得太麻烦,就是把两种酶在合适的Buffer里工作就可以了。引物前加酶切位点也很好弄,把自己需要用的酶切序列添加到引物前段保证引物匹配序列不低于15bp就好。同时在酶切位点前加几个保护碱基。载体选择根据你的需要定,有合适的酶切位点。构建也一样根据需要。
hehe
2楼2014-01-02 08:57:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

永远一片天

新虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by lvbobo823 at 2014-01-02 08:57:09
双酶切不应该觉得太麻烦,就是把两种酶在合适的Buffer里工作就可以了。引物前加酶切位点也很好弄,把自己需要用的酶切序列添加到引物前段保证引物匹配序列不低于15bp就好。同时在酶切位点前加几个保护碱基。载体选择 ...

你好,我想请问一下如何在引物两端加保护碱基呢?酶切位点的两端都加吗?网上有许多保护碱基 的汇总,但不知道是否可靠?
4楼2014-01-03 21:59:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

永远一片天

新虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by sxxuan at 2014-01-02 09:28:36
你可以看看pET原核表达手册,里面讲了很多理论知识,虽然主要是原核表达载体方面的构建,但也可以满足你的需求。
另外不知道你做双酶切构建载体是用于哪一方面,所以是不能具体地和你讲怎么做到。不管怎样,选择酶 ...

想问一下如何在引物两端加入保护碱基?
5楼2014-01-03 22:00:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料与化工考研调剂 +8 孅華 2026-03-22 8/400 2026-03-25 11:45 by userper
[考研] 295求调剂 +6 一志愿京区211 2026-03-18 8/400 2026-03-25 10:28 by userper
[考研] 考研调剂 +4 呼呼?~+123456 2026-03-24 4/200 2026-03-24 23:16 by barlinike
[考研] 08工学调剂 +12 用户573181 2026-03-20 17/850 2026-03-24 21:45 by 番茄炖了西红柿
[考研] 0856材料专硕353求调剂 +6 NIFFFfff 2026-03-20 6/300 2026-03-24 21:02 by hello七七
[考研] 307求调剂 +5 超级伊昂大王 2026-03-24 5/250 2026-03-24 15:46 by 星空星月
[考研] 一志愿吉大化学322求调剂 +4 17501029541 2026-03-23 6/300 2026-03-24 10:21 by 戴围脖的小蚊子
[考研] 一志愿河北工业大学0817化工278分求调剂 +7 jhybd 2026-03-23 12/600 2026-03-24 09:03 by jhybd
[考研] 一志愿重庆大学085700资源与环境,总分308求调剂 +7 墨墨漠 2026-03-23 8/400 2026-03-23 20:36 by Creta
[考研] 一志愿南京理工大学085701资源与环境302分求调剂 +5 葵梓卫队 2026-03-18 7/350 2026-03-23 16:26 by lingjue
[考研] 298求调剂 +8 上岸6666@ 2026-03-20 8/400 2026-03-23 11:02 by laoshidan
[考研] 070300,一志愿北航320求调剂 +3 Jerry0216 2026-03-22 5/250 2026-03-23 09:16 by 。。堂堂
[考研] 石河子大学(211、双一流)硕博研究生长期招生公告 +3 李子目 2026-03-22 3/150 2026-03-22 21:01 by 怎么释怀
[考研] 311求调剂 +6 冬十三 2026-03-18 6/300 2026-03-22 20:18 by edmund7
[考研] 初试 317 +7 半拉月丙 2026-03-20 7/350 2026-03-21 22:26 by peike
[考研] 考研调剂 +3 呼呼?~+123456 2026-03-21 3/150 2026-03-21 20:04 by 无际的草原
[考研] 311求调剂 +3 勇敢的小吴 2026-03-20 3/150 2026-03-21 17:40 by ColorlessPI
[考研] 330求调剂 +4 小材化本科 2026-03-18 4/200 2026-03-20 23:13 by JourneyLucky
[考研] 材料与化工 322求调剂 +4 然11 2026-03-19 4/200 2026-03-20 22:12 by luoyongfeng
[考研] 0856调剂,是学校就去 +8 sllhht 2026-03-19 9/450 2026-03-20 14:25 by 无懈可击111
信息提示
请填处理意见