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RNA提取后跑胶泳道条带弥散,有亮带,请教这是什么原因呢?
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jiebingzh
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RNA提取后跑胶泳道条带弥散,有亮带,请教这是什么原因呢?
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恒压140v跑19min。
20131220_ABCD-MZH-裁剪后.jpg
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2013-12-20 14:34:28
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Originally posted by
cswzsw
at 2013-12-20 23:21:39
典型的扩增杂带,非特异性扩增。解决方案,退火温度提高,延伸时间缩短,混合样品时放在冰上,尽量不要对着样品说话,以免DNA污染,因为样品很多混合样品的时间肯定很长,温度低,引物和模板非特异性结合较多,这时 ...
不是啊,提取RNA后,跑胶检测RNA完整性,还没到RCR呢
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2013-12-21 07:59:57
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2013-12-23 14:53:48
典型的扩增杂带,非特异性扩增。解决方案,退火温度提高,延伸时间缩短,混合样品时放在冰上,尽量不要对着样品说话,以免DNA污染,因为样品很多混合样品的时间肯定很长,温度低,引物和模板非特异性结合较多,这时候Tap酶有活性,会非特异性扩增
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2013-12-20 23:21:39
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2013-12-23 14:53:52
电泳图可以看到微弱的三条带而且已经弥散开了。你提的RNA浓度很低,估计还是第一步细胞裂解不充分。而且操作过程中RNA降解严重。
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大家相互帮助哈
5楼
2013-12-22 00:43:48
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可以告诉你,你这就属于提取失败,没有一个提取成功
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Last edited by 27927025 on 2013-12-22 at 06:48
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2013-12-22 06:43:02
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使用天根的提取试剂盒Trizon法,枪头和离心管灭菌三次,严格按照实验说明书做下来,肯定成功,
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7楼
2013-12-22 06:47:24
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at 2013-12-22 06:47:24
使用天根的提取试剂盒Trizon法,枪头和离心管灭菌三次,严格按照实验说明书做下来,肯定成功,
就是用的天根的提取试剂盒Trizon法啊,前期提不出来,后来改良后就提成这样
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8楼
2013-12-22 07:46:50
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luwei13566
at 2013-12-22 00:43:48
电泳图可以看到微弱的三条带而且已经弥散开了。你提的RNA浓度很低,估计还是第一步细胞裂解不充分。而且操作过程中RNA降解严重。
300多ng/ul
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9楼
2013-12-22 07:47:22
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27927025
at 2013-12-22 06:43:02
可以告诉你,你这就属于提取失败,没有一个提取成功
感觉像,请教一般都怎么提的呢?
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10楼
2013-12-22 07:48:00
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