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jiebingzh

木虫 (小有名气)

[交流] RNA提取后跑胶泳道条带弥散，有亮带，请教这是什么原因呢？ 已有16人参与

恒压140v跑19min。
RNA提取后跑胶泳道条带弥散，有亮带，请教这是什么原因呢？
20131220_ABCD-MZH-裁剪后.jpg
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1楼 2013-12-20 14:34:28
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jiebingzh

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cswzsw at 2013-12-20 23:21:39
典型的扩增杂带，非特异性扩增。解决方案，退火温度提高，延伸时间缩短，混合样品时放在冰上，尽量不要对着样品说话，以免DNA污染，因为样品很多混合样品的时间肯定很长，温度低，引物和模板非特异性结合较多，这时 ...

不是啊，提取RNA后，跑胶检测RNA完整性，还没到RCR呢
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4楼2013-12-21 07:59:57
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cswzsw

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★ ★
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kx444555: 金币+4, 鼓励交流 2013-12-23 14:53:48
典型的扩增杂带，非特异性扩增。解决方案，退火温度提高，延伸时间缩短，混合样品时放在冰上，尽量不要对着样品说话，以免DNA污染，因为样品很多混合样品的时间肯定很长，温度低，引物和模板非特异性结合较多，这时候Tap酶有活性，会非特异性扩增
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2楼2013-12-20 23:21:39
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yuxiangdan

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
试试150V，10分钟！！时间越长降解越多

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成功者永不放弃，放弃者永不成功。
3楼2013-12-20 23:57:41
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luwei13566

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-12-23 14:53:52
电泳图可以看到微弱的三条带而且已经弥散开了。你提的RNA浓度很低，估计还是第一步细胞裂解不充分。而且操作过程中RNA降解严重。
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大家相互帮助哈
5楼2013-12-22 00:43:48
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27927025

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
可以告诉你，你这就属于提取失败，没有一个提取成功

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[ Last edited by 27927025 on 2013-12-22 at 06:48 ]
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6楼2013-12-22 06:43:02
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27927025

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
使用天根的提取试剂盒Trizon法，枪头和离心管灭菌三次，严格按照实验说明书做下来，肯定成功，

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7楼2013-12-22 06:47:24
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jiebingzh

木虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 27927025 at 2013-12-22 06:47:24
使用天根的提取试剂盒Trizon法，枪头和离心管灭菌三次，严格按照实验说明书做下来，肯定成功，

就是用的天根的提取试剂盒Trizon法啊，前期提不出来，后来改良后就提成这样
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8楼2013-12-22 07:46:50
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jiebingzh

木虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by luwei13566 at 2013-12-22 00:43:48
电泳图可以看到微弱的三条带而且已经弥散开了。你提的RNA浓度很低，估计还是第一步细胞裂解不充分。而且操作过程中RNA降解严重。

300多ng/ul
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9楼2013-12-22 07:47:22
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jiebingzh

木虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 27927025 at 2013-12-22 06:43:02
可以告诉你，你这就属于提取失败，没有一个提取成功

感觉像，请教一般都怎么提的呢？
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10楼2013-12-22 07:48:00
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