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long7832

木虫 (正式写手)

降解吧

[ 发自小木虫客户端 ]
21楼2013-12-23 00:05:04
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luwei13566

木虫 (正式写手)

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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-01-27 21:31:22
引用回帖:
10楼: Originally posted by jiebingzh at 2013-12-22 07:48:00
感觉像,请教一般都怎么提的呢?...

枪头、离心管一类的有条件的话统统用DEPC水处理,没有条件的话二次灭菌处理也行。提取RNA所用的试剂比如氯仿、异丙醇、无水乙醇一类统统不要和其他实验的混用,实验尽量挑一个没人的地方,实验前把做实验的桌子用酒精擦一遍。操作的时候带口罩,不要说话,不要让无关人等靠近,最忌讳人来人往从你旁边过或者在你实验地点旁边说话,提取全程冰上操作,而且操作要快一点
    如果你是用液氮研磨的话,研钵用前一定要烧一烧,我这里一般都是用酒精擦净后再往研钵里倒点酒精点燃烧一下,然后等待其自然冷却。研磨的时候也要注意下研钵的温度,磨几下及时往研钵里添加液氮,要磨成细粉才可。
    再问一下,你下一步是要做RT-PCR还是定量,如果RT-PCR的话RNA质量可以稍微差点,如果定量的话你就得努把力了!
大家相互帮助哈
22楼2013-12-23 00:17:59
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yz_wuhan

新虫 (初入文坛)

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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-01-27 21:31:28
组织裂解不充分,蛋白含量偏高。解决方案:减少组织用量(10-20mg组织/ml裂解液);匀浆组织后都要保持在冰上,防止RNA降解。还有就是在三氯甲烷分离水相前先离心去掉组织残渣,可以最大程度降低水相中的蛋白污染。
23楼2013-12-23 02:13:49
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jihuasong

铁虫 (初入文坛)


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进来学习的。。

[ Last edited by jihuasong on 2013-12-23 at 08:33 ]
命运掌握在自已手中
24楼2013-12-23 08:31:56
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sinoer

铜虫 (小有名气)



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还可以,胶不是太好
25楼2013-12-23 12:27:05
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27927025

金虫 (正式写手)

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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-01-27 21:31:39
引用回帖:
10楼: Originally posted by jiebingzh at 2013-12-22 07:48:00
感觉像,请教一般都怎么提的呢?...

跑琼脂糖胶的时候电泳槽是RNA专用的吗?如果不是一定用氢氧化钠泡洗过夜,再用双蒸水清洗干净,防止这个步骤的降解和污染,以后这个电泳槽可以专门用来跑RNA,再按照我前面告诉你的注意事项绝对没问题,使用过程中的耗材还是一定要灭菌三次。祝你成功

[ 发自小木虫客户端 ]
26楼2013-12-24 07:46:59
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jiebingzh

木虫 (小有名气)

引用回帖:
22楼: Originally posted by luwei13566 at 2013-12-23 00:17:59
枪头、离心管一类的有条件的话统统用DEPC水处理,没有条件的话二次灭菌处理也行。提取RNA所用的试剂比如氯仿、异丙醇、无水乙醇一类统统不要和其他实验的混用,实验尽量挑一个没人的地方,实验前把做实验的桌子用酒 ...

测序啊,也要RT及定量
27楼2013-12-24 14:56:14
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