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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 存档旧帖 » RNA提取后跑胶泳道条带弥散，有亮带，请教这是什么原因呢？
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long7832

木虫 (正式写手)
降解吧

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21楼2013-12-23 00:05:04
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luwei13566

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-01-27 21:31:22
引用回帖:
10楼: Originally posted by jiebingzh at 2013-12-22 07:48:00
感觉像，请教一般都怎么提的呢？...

枪头、离心管一类的有条件的话统统用DEPC水处理，没有条件的话二次灭菌处理也行。提取RNA所用的试剂比如氯仿、异丙醇、无水乙醇一类统统不要和其他实验的混用，实验尽量挑一个没人的地方，实验前把做实验的桌子用酒精擦一遍。操作的时候带口罩，不要说话，不要让无关人等靠近，最忌讳人来人往从你旁边过或者在你实验地点旁边说话，提取全程冰上操作，而且操作要快一点
    如果你是用液氮研磨的话，研钵用前一定要烧一烧，我这里一般都是用酒精擦净后再往研钵里倒点酒精点燃烧一下，然后等待其自然冷却。研磨的时候也要注意下研钵的温度，磨几下及时往研钵里添加液氮，要磨成细粉才可。
    再问一下，你下一步是要做RT-PCR还是定量，如果RT-PCR的话RNA质量可以稍微差点，如果定量的话你就得努把力了！
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大家相互帮助哈
22楼2013-12-23 00:17:59
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yz_wuhan

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-01-27 21:31:28
组织裂解不充分，蛋白含量偏高。解决方案：减少组织用量（10-20mg组织/ml裂解液）；匀浆组织后都要保持在冰上，防止RNA降解。还有就是在三氯甲烷分离水相前先离心去掉组织残渣，可以最大程度降低水相中的蛋白污染。
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23楼2013-12-23 02:13:49
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jihuasong

铁虫 (初入文坛)
★
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进来学习的。。

[ Last edited by jihuasong on 2013-12-23 at 08:33 ]
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命运掌握在自已手中
24楼2013-12-23 08:31:56
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sinoer

铜虫 (小有名气)
★
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还可以，胶不是太好
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25楼2013-12-23 12:27:05
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27927025

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-01-27 21:31:39
引用回帖:
10楼: Originally posted by jiebingzh at 2013-12-22 07:48:00
感觉像，请教一般都怎么提的呢？...

跑琼脂糖胶的时候电泳槽是RNA专用的吗？如果不是一定用氢氧化钠泡洗过夜，再用双蒸水清洗干净，防止这个步骤的降解和污染，以后这个电泳槽可以专门用来跑RNA，再按照我前面告诉你的注意事项绝对没问题，使用过程中的耗材还是一定要灭菌三次。祝你成功

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26楼2013-12-24 07:46:59
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jiebingzh

木虫 (小有名气)
引用回帖:
22楼: Originally posted by luwei13566 at 2013-12-23 00:17:59
枪头、离心管一类的有条件的话统统用DEPC水处理，没有条件的话二次灭菌处理也行。提取RNA所用的试剂比如氯仿、异丙醇、无水乙醇一类统统不要和其他实验的混用，实验尽量挑一个没人的地方，实验前把做实验的桌子用酒 ...

测序啊，也要RT及定量
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27楼2013-12-24 14:56:14
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