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jiebingzh

木虫 (小有名气)

[交流] RNA提取后跑胶泳道条带弥散,有亮带,请教这是什么原因呢? 已有16人参与

恒压140v跑19min。
RNA提取后跑胶泳道条带弥散,有亮带,请教这是什么原因呢?
20131220_ABCD-MZH-裁剪后.jpg
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luwei13566

木虫 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-01-27 21:31:22
引用回帖:
10楼: Originally posted by jiebingzh at 2013-12-22 07:48:00
感觉像,请教一般都怎么提的呢?...

枪头、离心管一类的有条件的话统统用DEPC水处理,没有条件的话二次灭菌处理也行。提取RNA所用的试剂比如氯仿、异丙醇、无水乙醇一类统统不要和其他实验的混用,实验尽量挑一个没人的地方,实验前把做实验的桌子用酒精擦一遍。操作的时候带口罩,不要说话,不要让无关人等靠近,最忌讳人来人往从你旁边过或者在你实验地点旁边说话,提取全程冰上操作,而且操作要快一点
    如果你是用液氮研磨的话,研钵用前一定要烧一烧,我这里一般都是用酒精擦净后再往研钵里倒点酒精点燃烧一下,然后等待其自然冷却。研磨的时候也要注意下研钵的温度,磨几下及时往研钵里添加液氮,要磨成细粉才可。
    再问一下,你下一步是要做RT-PCR还是定量,如果RT-PCR的话RNA质量可以稍微差点,如果定量的话你就得努把力了!
大家相互帮助哈
22楼2013-12-23 00:17:59
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cswzsw

新虫 (初入文坛)

★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
kx444555: 金币+4, 鼓励交流 2013-12-23 14:53:48
典型的扩增杂带,非特异性扩增。解决方案,退火温度提高,延伸时间缩短,混合样品时放在冰上,尽量不要对着样品说话,以免DNA污染,因为样品很多混合样品的时间肯定很长,温度低,引物和模板非特异性结合较多,这时候Tap酶有活性,会非特异性扩增
2楼2013-12-20 23:21:39
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yuxiangdan

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
试试150V,10分钟!!时间越长降解越多

[ 发自小木虫客户端 ]
成功者永不放弃,放弃者永不成功。
3楼2013-12-20 23:57:41
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jiebingzh

木虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cswzsw at 2013-12-20 23:21:39
典型的扩增杂带,非特异性扩增。解决方案,退火温度提高,延伸时间缩短,混合样品时放在冰上,尽量不要对着样品说话,以免DNA污染,因为样品很多混合样品的时间肯定很长,温度低,引物和模板非特异性结合较多,这时 ...

不是啊,提取RNA后,跑胶检测RNA完整性,还没到RCR呢
4楼2013-12-21 07:59:57
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