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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 存档旧帖 » RNA提取后跑胶泳道条带弥散，有亮带，请教这是什么原因呢？
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liuqiuning

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
8楼: Originally posted by jiebingzh at 2013-12-22 07:46:50
就是用的天根的提取试剂盒Trizon法啊，前期提不出来，后来改良后就提成这样...

你可以试试艾德莱的试剂盒，效果是我做过最好的。

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11楼2013-12-22 07:52:56
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acvhreinlg

银虫 (正式写手)
提的不好

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科研是将金钱转换为知识的过程，而创新则是将知识转换为金钱的过程。
12楼2013-12-22 10:26:16
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zgb1982

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-01-27 21:30:38
目前RNA的试剂盒很成熟了，其实一般的公司差别不多或者说都能提出不错的RNA，还是自己操作手法的问题。可以跑变性胶试试，30min-40min都没问题，普通胶有时跑的的不好容易讲解。你这个提的有问题应该。枪头等的一般灭菌足够，影响不是主要的。很可能就是第一步的材料裂解不充分。
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13楼2013-12-22 11:05:43
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BlueYi213

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-01-27 21:30:52
不够纯！或者有些DNA污染，可以用DNA酶处理一下，在跑，如果环视这样，那就是RNA有问题了，也许得重新提取！
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14楼2013-12-22 12:38:43
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2008101111

金虫 (正式写手)

学术江湖混子
★
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很明显的RNA降解了
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自主创业者，捣腾生物试剂
15楼2013-12-22 13:18:59
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cswzsw

新虫 (初入文坛)
★
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4楼: Originally posted by jiebingzh at 2013-12-21 07:59:57
不是啊，提取RNA后，跑胶检测RNA完整性，还没到RCR呢...

不好意思，理解错误。你这就像五楼同学说的：应该是细胞裂解不充分，提取过程RNA降解严重，没有保护RNA的完整性，（RNA的降解通常发生在样品破碎/匀浆阶段）；还有就是可能与你使用的试剂盒有关，建议使用一个Vazyme公司的RNA isolater Total RNA Extraction Reagent试试，我使用的挺好的
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16楼2013-12-22 22:49:23
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kinshi

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
如果不是变性胶或者换的新缓冲液跑很容易降解，更何况还跑20分

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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17楼2013-12-22 23:05:44
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caoliang520

新虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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9楼: Originally posted by jiebingzh at 2013-12-22 07:47:22
300多ng/ul...

防降解。测得的浓度只是碱基的浓度。全降解了都有300

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18楼2013-12-22 23:29:06
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luwei13566

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
9楼: Originally posted by jiebingzh at 2013-12-22 07:47:22
300多ng/ul...

300多ng是把所有的核酸浓度算在一块的，也就是说降解后的小片段核酸也算进去的，提RNA的话还是先跑胶检测，看RNA条带不错了再去测浓度，一般我这里RNA检测都是150V 跑10min
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大家相互帮助哈
19楼2013-12-23 00:01:59
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woshishui916

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
有降解
可以考虑在提取的过程中加点保护剂
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20楼2013-12-23 00:04:35
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