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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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jiebingzh

木虫 (小有名气)

[交流] RNA提取后跑胶泳道条带弥散,有亮带,请教这是什么原因呢? 已有16人参与

恒压140v跑19min。
RNA提取后跑胶泳道条带弥散,有亮带,请教这是什么原因呢?
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jiebingzh

木虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cswzsw at 2013-12-20 23:21:39
典型的扩增杂带,非特异性扩增。解决方案,退火温度提高,延伸时间缩短,混合样品时放在冰上,尽量不要对着样品说话,以免DNA污染,因为样品很多混合样品的时间肯定很长,温度低,引物和模板非特异性结合较多,这时 ...

不是啊,提取RNA后,跑胶检测RNA完整性,还没到RCR呢
4楼2013-12-21 07:59:57
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cswzsw

新虫 (初入文坛)

★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
kx444555: 金币+4, 鼓励交流 2013-12-23 14:53:48
典型的扩增杂带,非特异性扩增。解决方案,退火温度提高,延伸时间缩短,混合样品时放在冰上,尽量不要对着样品说话,以免DNA污染,因为样品很多混合样品的时间肯定很长,温度低,引物和模板非特异性结合较多,这时候Tap酶有活性,会非特异性扩增
2楼2013-12-20 23:21:39
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yuxiangdan

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
试试150V,10分钟!!时间越长降解越多

[ 发自小木虫客户端 ]
成功者永不放弃,放弃者永不成功。
3楼2013-12-20 23:57:41
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luwei13566

木虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-12-23 14:53:52
电泳图可以看到微弱的三条带而且已经弥散开了。你提的RNA浓度很低,估计还是第一步细胞裂解不充分。而且操作过程中RNA降解严重。
大家相互帮助哈
5楼2013-12-22 00:43:48
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27927025

金虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
可以告诉你,你这就属于提取失败,没有一个提取成功

[ 发自小木虫客户端 ]

[ Last edited by 27927025 on 2013-12-22 at 06:48 ]
6楼2013-12-22 06:43:02
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27927025

金虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
使用天根的提取试剂盒Trizon法,枪头和离心管灭菌三次,严格按照实验说明书做下来,肯定成功,

[ 发自小木虫客户端 ]
7楼2013-12-22 06:47:24
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jiebingzh

木虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 27927025 at 2013-12-22 06:47:24
使用天根的提取试剂盒Trizon法,枪头和离心管灭菌三次,严格按照实验说明书做下来,肯定成功,

就是用的天根的提取试剂盒Trizon法啊,前期提不出来,后来改良后就提成这样
8楼2013-12-22 07:46:50
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jiebingzh

木虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by luwei13566 at 2013-12-22 00:43:48
电泳图可以看到微弱的三条带而且已经弥散开了。你提的RNA浓度很低,估计还是第一步细胞裂解不充分。而且操作过程中RNA降解严重。

300多ng/ul
9楼2013-12-22 07:47:22
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jiebingzh

木虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 27927025 at 2013-12-22 06:43:02
可以告诉你,你这就属于提取失败,没有一个提取成功

感觉像,请教一般都怎么提的呢?
10楼2013-12-22 07:48:00
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