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kxmytmy

银虫 (正式写手)

[求助] 求助 反转录 已有2人参与

想请教一下各位，是关于做木本植物根相关基因的实验：根的RNA提取之后检测质量很好，可是做完反转之后跑PCR检测却是什么都没有，是什么原因呢？谢谢大家了
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1楼 2013-12-19 16:11:55
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遥远的山那边

新虫 (初入文坛)
请问您用的什么方法提取的根RNA？包括什么牌子的产品！提取后的RNA浓度怎么样？
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2楼2013-12-19 20:07:47
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用内参基因比如Actin，GAPDH，Ubiquitin这类基因的引物测试了吗？

你说“可是做完反转之后跑PCR检测却是什么都没有”你PCR什么基因的呢？表达丰度如何？
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
3楼2013-12-19 20:43:16
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kxmytmy

银虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by gyesang at 2013-12-19 20:43:16
用内参基因比如Actin，GAPDH，Ubiquitin这类基因的引物测试了吗？

你说“可是做完反转之后跑PCR检测却是什么都没有”你PCR什么基因的呢？表达丰度如何？

我是反转之后拿Actin检测的时候什么都没有
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4楼2013-12-19 21:31:46
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Dr.G

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+5, 非常好！ 2013-12-20 11:48:03
gyesang: 回帖置顶 2013-12-20 11:48:08
你是逆转录后，以cDNA为模板PCR，结果扩不出来条带
1.逆转录过程是否有问题，cDNA模板浓度会不会太低了
2.PCR条件设置OK吗？模板要是没有问题，把退火温度降低2度试一试
3.能不能多给点你的实验条件信息
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5楼2013-12-19 21:55:21
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kxmytmy

银虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 遥远的山那边 at 2013-12-19 20:07:47
请问您用的什么方法提取的根RNA？包括什么牌子的产品！提取后的RNA浓度怎么样？

是用试剂盒提取的，RNA浓度没有问题挺好的，大都在一千多ng
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6楼2013-12-19 22:08:33
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kxmytmy

银虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by Dr.G at 2013-12-19 21:55:21
你是逆转录后，以cDNA为模板PCR，结果扩不出来条带
1.逆转录过程是否有问题，cDNA模板浓度会不会太低了
2.PCR条件设置OK吗？模板要是没有问题，把退火温度降低2度试一试
3.能不能多给点你的实验条件信息

您说的这个应该不会有问题，条件我都试过的，并且所用的引物及试剂都是比人做成功之后我拿过来用的。我是实在不知道是什么原因了
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7楼2013-12-19 22:10:41
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