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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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kxmytmy

主管区长

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!


[求助] 求助 反转录 已有2人参与

想请教一下各位,是关于做木本植物根相关基因的实验:根的RNA提取之后检测质量很好,可是做完反转之后跑PCR检测却是什么都没有,是什么原因呢?谢谢大家了
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Dr.G

超级版主

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+5, 非常好! 2013-12-20 11:48:03
gyesang: 回帖置顶 2013-12-20 11:48:08
你是逆转录后,以cDNA为模板PCR,结果扩不出来条带
1.逆转录过程是否有问题,cDNA模板浓度会不会太低了
2.PCR条件设置OK吗?模板要是没有问题,把退火温度降低2度试一试
3.能不能多给点你的实验条件信息
5楼2013-12-19 21:55:21
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普通回帖

遥远的山那边

专家顾问

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

请问您用的什么方法提取的根RNA?包括什么牌子的产品!提取后的RNA浓度怎么样?
2楼2013-12-19 20:07:47
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gyesang

禁虫

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
用内参基因比如Actin,GAPDH,Ubiquitin这类基因的引物测试了吗?

你说“可是做完反转之后跑PCR检测却是什么都没有”你PCR什么基因的呢?表达丰度如何?
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
3楼2013-12-19 20:43:16
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kxmytmy

实习版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!


引用回帖:
3楼: Originally posted by gyesang at 2013-12-19 20:43:16
用内参基因比如Actin,GAPDH,Ubiquitin这类基因的引物测试了吗?

你说“可是做完反转之后跑PCR检测却是什么都没有”你PCR什么基因的呢?表达丰度如何?

我是反转之后拿Actin检测的时候什么都没有
4楼2013-12-19 21:31:46
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kxmytmy

专家顾问

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!


引用回帖:
2楼: Originally posted by 遥远的山那边 at 2013-12-19 20:07:47
请问您用的什么方法提取的根RNA?包括什么牌子的产品!提取后的RNA浓度怎么样?

是用试剂盒提取的,RNA浓度没有问题挺好的,大都在一千多ng
6楼2013-12-19 22:08:33
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kxmytmy

管理员

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!


引用回帖:
5楼: Originally posted by Dr.G at 2013-12-19 21:55:21
你是逆转录后,以cDNA为模板PCR,结果扩不出来条带
1.逆转录过程是否有问题,cDNA模板浓度会不会太低了
2.PCR条件设置OK吗?模板要是没有问题,把退火温度降低2度试一试
3.能不能多给点你的实验条件信息

您说的这个应该不会有问题,条件我都试过的,并且所用的引物及试剂都是比人做成功之后我拿过来用的。我是实在不知道是什么原因了
7楼2013-12-19 22:10:41
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