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张爽00100

金虫 (小有名气)

[求助] 双酶切之后,基因变小了

我的序列差不多有715bp,PCR扩增,胶回收之后双酶切,酶切体系为50ul:
DNA 10UL
BamH I   1UL
Xho I 1ul
10*bufferG 5UL
dd H2O     33UL
37度酶切两个小时。
我的引物上有酶切位点,前边各加了两个保护碱基,酶切之后应该大小差不多,结果酶切之后的大小比为酶切的小了50-100bp怎么回事,求各位虫子指教啊
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张爽00100

金虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by jennifermatt at 2013-12-07 09:23:02
你连接T载体测序了吗?

没有呢,载体是之前实验室保存的,没有测序
9楼2013-12-07 17:21:55
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查看全部 11 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2013-12-01 14:50:25
从胶上看的大小不很准确,如果酶没有过量很多或者酶切条件不正确的话,一般不会切过。不放心的话连接到载体里测序。
2楼2013-12-01 14:45:08
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张爽00100

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-12-01 14:45:08
从胶上看的大小不很准确,如果酶没有过量很多或者酶切条件不正确的话,一般不会切过。不放心的话连接到载体里测序。

谢谢了
3楼2013-12-02 10:41:23
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Atlantistree

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

排查过序列内部的酶切位点没?如果序列内部没有酶切位点,应该不会切过
上善若水
4楼2013-12-05 11:17:06
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