24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 1673  |  回复: 5

zpsl1986

新虫 (初入文坛)

[求助] 双酶切转化之后不长菌

求助大家,我构建载体,用的BamHI 和XbaI双酶切,载体大小10000bp,基因大小1000bp,酶切连接之后转化,转化几次都不长菌,做的对照正常,说明转化没有问题,平板的抗性也没问题,看网上说XbaI受甲基化影响,我用的是top10的大肠杆菌感受态,不知道跟甲基化有什么关系。希望大家给分析一下!不胜感激!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

oylb

禁言 (正式写手)

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-11-04 16:04:06
本帖内容被屏蔽

2楼2013-11-04 11:32:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zpsl1986

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by oylb at 2013-11-04 11:32:01
应该是连接效率的问题,或者其他的潜在可能,比如PCR产物是否为目的片段(有可能为假阳性)、PCR产物末端的保护碱基是否合适,等等。

我以前用过这个载体,也出现这样的问题,当时一个板上就长了那一个菌,结果还是阳性。连接效率问题的话,多加点连接酶可以吗?
3楼2013-11-04 15:27:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

eulota

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-11-07 16:41:46
我最近正好刚刚用这两个酶做双酶切连接构建,一切很顺利,几乎都是阳性克隆。
我用的是酶是NEB的。lz说的比较含糊,这个是常规技术,双酶切连接理论上成功率是相当高的。没有太多可说的,2个建议仅供参考:
1. 酶切问题,你是怎么得到酶切处理后的片段和载体的呢?如何确保你得到酶切处理成功了呢?双酶切的缓冲液是否正确呢?
2.连接问题,你是如何做的连接反应呢?是否可改进?比如4度过夜,或者16度超过4小时?
4楼2013-11-07 09:40:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shanqian1988

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-11-07 16:41:55
估计连接酶的问题吧,我遇到过这种情况,换连接酶就好啦
5楼2013-11-07 10:13:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

董淑浩

银虫 (小有名气)

建议你连接t载体之后再做看看。
好好努力
6楼2013-11-07 10:15:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 zpsl1986 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 295求调剂 +4 A你好研究生 2026-04-04 5/250 2026-04-04 22:46 by yu221
[考研] 材料调剂 +10 懒羊羊轻置玉臀 2026-04-02 11/550 2026-04-04 21:56 by laoshidan
[考研] 277求调剂 +4 12A3 2026-04-02 5/250 2026-04-04 20:28 by 蓝云思雨
[考研] 一志愿安徽某211 0703化学总分339求调剂 +6 晚风不晚 2026-04-04 6/300 2026-04-04 20:11 by dongzh2009
[考研] 一志愿沪985,326分求调剂 +3 刘墨墨 2026-04-03 3/150 2026-04-04 11:16 by 悲伤的芋头
[考研] 材料专业383求调剂 +8 郭阳阳阳成 2026-04-03 8/400 2026-04-04 10:29 by Rednal.
[考研] 一志愿上海海洋大学083200食品学硕,求调剂,接受其他专业083200 +3 what张 2026-04-04 4/200 2026-04-04 09:50 by rzh123456
[考研] 268求调剂 +8 你好tg 2026-04-03 9/450 2026-04-04 05:08 by gswylq
[考研] 材料专硕调剂 +18 椰椰。 2026-03-29 18/900 2026-04-03 16:45 by 玲玲0606
[考研] 283求调剂 +3 jiouuu 2026-04-03 4/200 2026-04-03 13:28 by jiouuu
[考研] 366求调剂 +7 sbdnd 2026-04-03 7/350 2026-04-03 12:40 by cymywx
[考研] 312求调剂 +4 赊月色 2026-04-02 5/250 2026-04-03 08:21 by fangshan711
[考研] 085600,320分求调剂 +6 大馋小子 2026-04-02 6/300 2026-04-02 21:54 by dongzh2009
[考研] 考研调剂 +12 Amber00 2026-03-31 12/600 2026-04-02 09:04 by sanrepian
[考研] 省双一流重点一本大学招收调剂 +4 wwwwffffff 2026-03-31 7/350 2026-04-01 15:23 by wwwwffffff
[考研] 085601 329分调剂 +6 yzsa12 2026-03-31 6/300 2026-03-31 15:23 by yanflower7133
[考研] 英一数一总分334求调剂 +4 陈阳坤 2026-03-31 4/200 2026-03-31 14:22 by 记事本2026
[考研] 生物考研337分求调剂 +4 cgxin 2026-03-30 6/300 2026-03-31 14:18 by 记事本2026
[考研] 262求调剂 +7 ZZ..000 2026-03-30 8/400 2026-03-31 10:05 by cal0306
[考研] 083000环境科学与工程调剂,总分281 +4 橙子(胜意) 2026-03-30 4/200 2026-03-31 00:44 by Linzejun
信息提示
请填处理意见