24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 1669  |  回复: 5
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

zpsl1986

管理员

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

[求助] 双酶切转化之后不长菌

求助大家,我构建载体,用的BamHI 和XbaI双酶切,载体大小10000bp,基因大小1000bp,酶切连接之后转化,转化几次都不长菌,做的对照正常,说明转化没有问题,平板的抗性也没问题,看网上说XbaI受甲基化影响,我用的是top10的大肠杆菌感受态,不知道跟甲基化有什么关系。希望大家给分析一下!不胜感激!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

董淑浩

版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

建议你连接t载体之后再做看看。
好好努力
6楼2013-11-07 10:15:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

oylb

兑换贵宾

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-11-04 16:04:06
本帖内容被屏蔽

2楼2013-11-04 11:32:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zpsl1986

主管区长

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

引用回帖:
2楼: Originally posted by oylb at 2013-11-04 11:32:01
应该是连接效率的问题,或者其他的潜在可能,比如PCR产物是否为目的片段(有可能为假阳性)、PCR产物末端的保护碱基是否合适,等等。

我以前用过这个载体,也出现这样的问题,当时一个板上就长了那一个菌,结果还是阳性。连接效率问题的话,多加点连接酶可以吗?
3楼2013-11-04 15:27:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

eulota

实习版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-11-07 16:41:46
我最近正好刚刚用这两个酶做双酶切连接构建,一切很顺利,几乎都是阳性克隆。
我用的是酶是NEB的。lz说的比较含糊,这个是常规技术,双酶切连接理论上成功率是相当高的。没有太多可说的,2个建议仅供参考:
1. 酶切问题,你是怎么得到酶切处理后的片段和载体的呢?如何确保你得到酶切处理成功了呢?双酶切的缓冲液是否正确呢?
2.连接问题,你是如何做的连接反应呢?是否可改进?比如4度过夜,或者16度超过4小时?
4楼2013-11-07 09:40:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿西安交大材料学硕(英一数二)347,求调剂到高分子/材料相关专业 +5 zju51 2026-03-31 7/350 2026-04-01 00:47 by fmesaito
[考研] 材料专硕306英一数二 +3 z1z2z3879 2026-03-31 3/150 2026-04-01 00:39 by fmesaito
[基金申请] 面上5B能上会吗? +8 redcom 2026-03-29 8/400 2026-03-31 15:53 by niuailing
[考研] 085601 材料工程 313分 求调剂 +6 Ong3 2026-03-27 6/300 2026-03-31 15:18 by yanflower7133
[考研] 085600材料与化工329分求调剂 +5 这是有太阳哇 2026-03-25 5/250 2026-03-31 09:59 by luoyongfeng
[考研] 0817化工学硕调剂 +7 努力上岸中! 2026-03-31 7/350 2026-03-31 09:58 by nalakaiqi
[考研] 323分 食品与营养调剂 +3 嘿ooo 2026-03-31 3/150 2026-03-31 09:38 by longlotian
[考研] 22408 359分调剂 +4 Qshers 2026-03-27 8/400 2026-03-31 08:53 by Qshers
[考研] 抱歉 +4 田洪有 2026-03-30 4/200 2026-03-30 21:26 by mumin1990
[考研] 322求调剂 +10 宋明欣 2026-03-27 10/500 2026-03-30 18:47 by 544594351
[考研] 348求调剂 +6 小懒虫不懒了 2026-03-28 6/300 2026-03-30 10:29 by Evan_Liu
[考研] 求调剂 +4 QiMing7 2026-03-25 5/250 2026-03-29 21:10 by 唐沐儿
[考研] 【求调剂】085601材料工程专硕 | 总分272 | +7 脚滑的守法公民 2026-03-27 7/350 2026-03-29 20:21 by dophin1985
[考研] 298求调剂 +3 种圣赐 2026-03-29 3/150 2026-03-29 12:06 by longlotian
[考研] 356求调剂 +3 gysy?s?a 2026-03-28 3/150 2026-03-29 00:33 by 544594351
[考研] 药学105500求调剂 +3 Ssun。。 2026-03-28 3/150 2026-03-28 11:24 by lxf170613
[考研] 一志愿 西北大学 总分282 英语一62 求调剂 +7 18419759900 2026-03-25 8/400 2026-03-27 16:38 by 18419759900
[考研] 考研调剂 +9 小蜡新笔 2026-03-26 9/450 2026-03-27 11:10 by 不吃魚的貓
[考研] 调剂求收留 +7 果然有我 2026-03-26 7/350 2026-03-27 00:26 by wxiongid
[考研] 302求调剂 +4 锦衣卫藤椒 2026-03-25 4/200 2026-03-25 16:29 by 功夫疯狂
信息提示
请填处理意见