24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 1668  |  回复: 5

zpsl1986

新虫 (初入文坛)

[求助] 双酶切转化之后不长菌

求助大家,我构建载体,用的BamHI 和XbaI双酶切,载体大小10000bp,基因大小1000bp,酶切连接之后转化,转化几次都不长菌,做的对照正常,说明转化没有问题,平板的抗性也没问题,看网上说XbaI受甲基化影响,我用的是top10的大肠杆菌感受态,不知道跟甲基化有什么关系。希望大家给分析一下!不胜感激!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

oylb

禁言 (正式写手)

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-11-04 16:04:06
本帖内容被屏蔽

2楼2013-11-04 11:32:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zpsl1986

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by oylb at 2013-11-04 11:32:01
应该是连接效率的问题,或者其他的潜在可能,比如PCR产物是否为目的片段(有可能为假阳性)、PCR产物末端的保护碱基是否合适,等等。

我以前用过这个载体,也出现这样的问题,当时一个板上就长了那一个菌,结果还是阳性。连接效率问题的话,多加点连接酶可以吗?
3楼2013-11-04 15:27:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

eulota

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-11-07 16:41:46
我最近正好刚刚用这两个酶做双酶切连接构建,一切很顺利,几乎都是阳性克隆。
我用的是酶是NEB的。lz说的比较含糊,这个是常规技术,双酶切连接理论上成功率是相当高的。没有太多可说的,2个建议仅供参考:
1. 酶切问题,你是怎么得到酶切处理后的片段和载体的呢?如何确保你得到酶切处理成功了呢?双酶切的缓冲液是否正确呢?
2.连接问题,你是如何做的连接反应呢?是否可改进?比如4度过夜,或者16度超过4小时?
4楼2013-11-07 09:40:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shanqian1988

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-11-07 16:41:55
估计连接酶的问题吧,我遇到过这种情况,换连接酶就好啦
5楼2013-11-07 10:13:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

董淑浩

银虫 (小有名气)

建议你连接t载体之后再做看看。
好好努力
6楼2013-11-07 10:15:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 zpsl1986 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 266分,求材料相关专业调剂 +10 哇呼哼呼哼 2026-03-30 12/600 2026-03-31 11:00 by 熊一刀
[考研] 311求调剂一志愿合肥工业大学 +7 秋二十二 2026-03-30 7/350 2026-03-31 10:51 by Jaylen.
[考研] 334求调剂 +6 Trying] 2026-03-31 6/300 2026-03-31 10:09 by 不吃魚的貓
[考研] 一志愿中国科学院大学265求调剂 +6 恬淡ye 2026-03-31 6/300 2026-03-31 10:03 by cal0306
[考研] 一志愿华东师范大学有机化学专业,初试351分,复试被刷求调剂! +7 真名有冰 2026-03-29 8/400 2026-03-30 21:08 by maaj02
[考研] 277跪求调剂 +8 1915668 2026-03-27 12/600 2026-03-30 21:01 by dophin1985
[考研] 085600 286分 材料求调剂 +11 麻辣鱿鱼 2026-03-27 12/600 2026-03-30 19:33 by Wang200018
[考研] 327求调剂 +5 小卡不卡. 2026-03-29 5/250 2026-03-30 19:30 by Wang200018
[考研] 293求调剂 +3 末未mm 2026-03-30 5/250 2026-03-30 17:23 by 王保杰33
[考研] 求调剂,一志愿 南京航空航天大学大学 ,080500材料科学与工程学硕 +6 @taotao 2026-03-26 7/350 2026-03-30 10:43 by 我是小康
[考研] 0856求调剂 +8 楒桉 2026-03-28 8/400 2026-03-30 10:00 by wzy-lxz
[考研] 317求调剂 +10 蛋黄咸肉粽 2026-03-26 10/500 2026-03-30 09:45 by longlotian
[考研] 316求调剂 +7 江辞666 2026-03-26 7/350 2026-03-28 21:28 by sanrepian
[考研] 283求调剂 +3 A child 2026-03-28 3/150 2026-03-28 15:41 by ms629
[考研] 材料求调剂一志愿哈工大324 +7 闫旭东 2026-03-28 9/450 2026-03-28 08:51 by Xu de nuo
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +4 崔wj 2026-03-26 4/200 2026-03-27 08:04 by chemisry
[考研] 中国科学院深圳先进技术研究院-光纤传感课题组招生-中国科学院大学、深圳理工大学联培 +5 YangTyu1 2026-03-26 5/250 2026-03-26 18:27 by 猫咪猫咪呀
[考研] 环境专硕324分求调剂推荐 +5 轩小宁—— 2026-03-26 5/250 2026-03-26 12:05 by i_cooler
[考研] 309求调剂 +4 gajsj 2026-03-25 5/250 2026-03-26 00:27 by Dyhoer
[考研] 机械学硕总分317求调剂!!!! +4 Acaciad 2026-03-25 4/200 2026-03-25 19:59 by hanserlol
信息提示
请填处理意见