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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 双酶切之后，基因变小了
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张爽00100

金虫 (小有名气)

[求助] 双酶切之后，基因变小了

我的序列差不多有715bp，PCR扩增，胶回收之后双酶切，酶切体系为50ul：
DNA 10UL
BamH I   1UL
Xho I 1ul
10*bufferG 5UL
dd H2O     33UL
37度酶切两个小时。
我的引物上有酶切位点，前边各加了两个保护碱基，酶切之后应该大小差不多，结果酶切之后的大小比为酶切的小了50-100bp怎么回事，求各位虫子指教啊
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1楼 2013-12-01 14:04:54
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张爽00100

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-12-01 14:45:08
从胶上看的大小不很准确，如果酶没有过量很多或者酶切条件不正确的话，一般不会切过。不放心的话连接到载体里测序。

谢谢了
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3楼2013-12-02 10:41:23
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2013-12-01 14:50:25
从胶上看的大小不很准确，如果酶没有过量很多或者酶切条件不正确的话，一般不会切过。不放心的话连接到载体里测序。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2013-12-01 14:45:08
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Atlantistree

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

排查过序列内部的酶切位点没？如果序列内部没有酶切位点，应该不会切过
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上善若水
4楼2013-12-05 11:17:06
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张爽00100

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by Atlantistree at 2013-12-05 11:17:06
排查过序列内部的酶切位点没？如果序列内部没有酶切位点，应该不会切过

查过了，基因内部没有这两个的酶切位点，不知道怎么回事，按照那个酶切之后连接转化然后就失败了
赞一下 回复此楼
5楼2013-12-06 15:59:41
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