| 查看: 1487 | 回复: 6 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
lipingzhou银虫 (初入文坛)
|
[求助]
RT-PCR电泳结果各位帮忙看看是什么原因
|
|
| 大家帮我看看RT-PCR电泳结果，我该怎么办，走投无路了。首尾是marker100-600bp的，第一部分的4个孔是324bp的，现在却P成分子量好大的；第二部分4个孔是263bp的，隐约可见；第三部分4个孔是360bp的，最后4个孔是内参318bp的，几乎没有。每个泳道下面都有糊状，怎么会这样，我该怎么改进？ 我的PCR条件是94度3min后94度30s，56度30s，72度45s，30个循环，72度5min。怎么改进？ |
回复此楼» 本帖附件资源列表
-
欢迎监督和反馈：小木虫仅提供交流平台，不对该内容负责。
本内容由用户自主发布，如果其内容涉及到知识产权问题，其责任在于用户本人，如对版权有异议，请联系邮箱：xiaomuchong@tal.com - 附件 1 : 20131118_副本.bmp
2013-11-19 16:05:51, 246.1 K
» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有217人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- PCR琼脂糖凝胶电泳图希望大家帮我分析一下
已经有12人回复
- PCR电泳图求解
已经有13人回复
- 半定量RT-PCR电泳条带越来越浅
已经有5人回复
- 同工酶电泳图片如何处理，请帮忙分析如下照片，谢谢
已经有9人回复
- RT-PCR结果分析求助
已经有5人回复
- 菌液PCR产物电泳图，怎么解释？
已经有12人回复
- 最近RT-PCR能够出来内参，却没有目的条带，请各位高手帮忙
已经有9人回复
- PCR后跑电泳，整个泳道都很亮，怎么回事？
已经有5人回复
- 这样的电泳图片是否代表PCR扩增成功了？
已经有26人回复
- rt-pcr电泳图，求好心虫友帮助分析一下，跪谢。。。
已经有14人回复
- 急求RT-PCR电泳图分析
已经有22人回复
- 恐怖的PCR电泳条带。。。。。。。。。。
已经有15人回复
- PCR电泳图怎么会这样？各位帮忙分析一下吧
已经有12人回复
- 两种引物的PCR电泳图，做了多次还是不解
已经有18人回复
- 我的PCR电泳图怎么这样的啊。。。
已经有11人回复
- 流感病毒RT-PCR，电泳老是跑不出条带~~~纠结！
已经有5人回复
- PCR后电泳条带异常
已经有10人回复
- 大家帮忙分析一下PCR电泳图
已经有14人回复
- PCR后凝胶电泳条带时有时无是怎么回事？
已经有5人回复
- 【求助/交流】pcr结果电泳条带很淡
已经有14人回复
- 【转帖】PCR技术详细步骤－从RNA抽提到电泳鉴定
已经有67人回复
lipingzhou
银虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 460
- 帖子: 15
- 在线: 16.5小时
- 虫号: 1175334
- 注册: 2010-12-22
- 专业: 细胞移植、组织再生与生物
3楼2013-11-20 13:13:18
cicelyzh
铁杆木虫 (职业作家)
- MolEPI: 10
- 应助: 1662 (讲师)
- 金币: 8693.8
- 红花: 72
- 帖子: 3516
- 在线: 456小时
- 虫号: 1614001
- 注册: 2012-02-13
- 专业: 生物化学
2楼2013-11-20 07:46:12
cicelyzh
铁杆木虫 (职业作家)
- MolEPI: 10
- 应助: 1662 (讲师)
- 金币: 8693.8
- 红花: 72
- 帖子: 3516
- 在线: 456小时
- 虫号: 1614001
- 注册: 2012-02-13
- 专业: 生物化学
【答案】应助回帖
|
你的引物浓度已经很低了，一般终浓度在0.1-0.5μM。引物是自己设计的？是否优化过PCR条件？做RT样品前，可以先用gDNA摸索一下引物扩增的最优条件。 用cDNA为模板PCR时循环数目要根据目标基因的表达丰度来定。你做RT-PCR的目的是扩增出cDNA片段，还是要定量？如果只是要P出目标基因就比较简单，只需先做一个预实验，然后调整循环数目和模板多少就可以比较理想地扩增出目标条带。如果要定量，需要在预实验的基础上做不同循环数目确定样品扩增出来的条带未到饱和，这样才有定量的意义。 你的扩增效果不好可能还与样品有关。你的RNA提得怎么样，用的是总RNA还是mRNA反转录的？RNA样品反转录前消化DNA是否完全？ 做真核样品的RT-PCR在引物设计时一般会选择跨越内含子，这样可以区分条带是由gDNA扩增出来的还是cDNA扩增出来的。 |
4楼2013-11-20 13:34:02
lipingzhou
银虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 460
- 帖子: 15
- 在线: 16.5小时
- 虫号: 1175334
- 注册: 2010-12-22
- 专业: 细胞移植、组织再生与生物
5楼2013-11-20 13:48:36
