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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 定量PCR目的基因与内参的Ct值差异大怎么解决
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新虫 (小有名气)

[交流] 定量PCR目的基因与内参的Ct值差异大怎么解决 已有2人参与

定量PCR：
问题1：内参240bp，基因140bp，有必要再重新设计内参引物吗？
       2：目的基因与内参的Ct值差异大。内参17-25，目的基因28-35。需要调整模板浓度吗？可不可以把内参模板稀释，而目的基因模板不稀释。
       3：扩增效率。内参标准曲线好做，240bp扩增效率接近100%。但是目的基因的扩增效率不好做，表达量比较低，表达量最高的组织Ct都有28,，标准曲线做得好不好跟起始浓度应该有关系吧。
谢谢！
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1楼 2013-11-06 09:53:49
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394929934

铜虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
俺也好奇。同样求解，顶起
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动物营养交流群181980105
2楼2013-11-11 21:24:08
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liu2883508

新虫 (初入文坛)
内参和目的基因的Ct值不用保持一致的，只要扩增效率好就行，有些基因表达量低，你的增加模板的浓度，或者换染料，SYBR染料做基因的表达，只能做到拷贝数大于5000的基因，小于这个拷贝数的基因没法检测到，Taqman探针的检测效率要高一些，就是要贵，也麻烦一些
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人生就是要不断的前进，忘掉不好的，记住好的向前行
3楼2013-11-12 11:23:53
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