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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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新虫 (小有名气)

[交流] 定量PCR目的基因与内参的Ct值差异大怎么解决 已有2人参与

定量PCR:
问题1:内参240bp,基因140bp,有必要再重新设计内参引物吗?
       2:目的基因与内参的Ct值差异大。内参17-25,目的基因28-35。需要调整模板浓度吗?可不可以把内参模板稀释,而目的基因模板不稀释。
       3:扩增效率。内参标准曲线好做,240bp扩增效率接近100%。但是目的基因的扩增效率不好做,表达量比较低,表达量最高的组织Ct都有28,,标准曲线做得好不好跟起始浓度应该有关系吧。
谢谢!
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394929934

铜虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
俺也好奇。同样求解,顶起
动物营养交流群181980105
2楼2013-11-11 21:24:08
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liu2883508

新虫 (初入文坛)

内参和目的基因的Ct值不用保持一致的,只要扩增效率好就行,有些基因表达量低,你的增加模板的浓度,或者换染料,SYBR染料做基因的表达,只能做到拷贝数大于5000的基因,小于这个拷贝数的基因没法检测到,Taqman探针的检测效率要高一些,就是要贵,也麻烦一些
人生就是要不断的前进,忘掉不好的,记住好的向前行
3楼2013-11-12 11:23:53
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