24小时热门版块排行榜    

查看: 4200  |  回复: 9

wh6125

铁虫 (初入文坛)

[求助] 设计了简并引物,PCR扩不出条带

本人欲克隆一条未知基因,从NCBI上下了几条其他物种上的该基因,应用CODEHOP结合Block Maker设计了几条简并引物,都没有扩出条带。首先确定cDNA是没问题的,已经用Actin验证过;PCR也用了不同的退火温度,还是不出条带。。。那是说明引物的问题了吧,但是真的不知道怎么设计引物了,郁闷死了,有没有高手能帮忙设计引物,或者指点一下也可以,谢谢~~
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

感兴趣的

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

用户注销 (正式写手)

本帖仅楼主可见
2楼2013-11-01 08:32:11
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

lyqifeih

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wh6125: 金币+5, 有帮助 2013-11-01 09:18:10
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-11-05 11:49:53
您的简并引物有几个不确定的碱基。做不出来原因很多,很多时候是目的引物浓度不够,我以前加了4个,用10uM引物P不出来,后来引物浓度提高10~100倍慢慢就能看到条带。
刚进入神经生物和电生理
3楼2013-11-01 08:49:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wh6125

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by lyqifeih at 2013-11-01 08:49:59
您的简并引物有几个不确定的碱基。做不出来原因很多,很多时候是目的引物浓度不够,我以前加了4个,用10uM引物P不出来,后来引物浓度提高10~100倍慢慢就能看到条带。

我问过一个师兄,他说有可能是引物浓度太高,导致引物不能结合模板,PCR中只扩增引物,导致引物条带特别亮。。。这个是应该降低引物浓度还是提高呢?
4楼2013-11-01 09:17:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lyqifeih

新虫 (小有名气)

你用什么酶扩增的,普通的Taq聚合酶会存在这个问题,我一般都用hotstart DNA 聚合酶,避免引物扩增。
刚进入神经生物和电生理
5楼2013-11-01 09:27:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wh6125

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by lyqifeih at 2013-11-01 09:27:34
你用什么酶扩增的,普通的Taq聚合酶会存在这个问题,我一般都用hotstart DNA 聚合酶,避免引物扩增。

我就用的普通的Mix,设置了各种梯度什么的,引物浓度也试了还是不行,要不也试试这个Hot start,看到Takara有这种Mix
6楼2013-11-04 19:03:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
7楼2015-05-04 15:45:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

竹砚

铜虫 (小有名气)

楼主实验成功了吗?我最近也在试简并引物,用的文献中的引物,但没扩增出来,现在也在自己试着设
记得心中的那个梦。
8楼2015-09-29 16:43:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

andywang6137

木虫 (著名写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 竹砚 at 2015-09-29 16:43:16
楼主实验成功了吗?我最近也在试简并引物,用的文献中的引物,但没扩增出来,现在也在自己试着设

你用的是codehop设计的简并引物不?结果怎么样?
9楼2015-10-26 17:46:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

羽化姚俊鹏

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
9楼: Originally posted by andywang6137 at 2015-10-25 21:46:07
你用的是codehop设计的简并引物不?结果怎么样?...

冒昧问一下,进行blockmake的氨基酸序列,您是怎么选择的?
志同道合
10楼2016-08-11 16:36:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 wh6125 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件,有关系吗? +24 木水思豆 2026-08-25 27/1350 2026-08-26 08:26 by yanchen918
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +21 羊腰板 2026-08-21 24/1200 2026-08-26 07:20 by finnigan
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 7K1CJE38xLG4 2026-08-25 5/250 2026-08-26 07:17 by cNXvBfCpiZOM
[基金申请] 今天务委会开完了,明天出结果吗 +18 angus9576 2026-08-25 22/1100 2026-08-26 00:41 by merchancy
[基金申请] 明天应该可查了!? +6 chengyan1220 2026-08-23 6/300 2026-08-25 19:45 by zfd97
[基金申请] 有没有大神帮我看看基金代码 28+4 1234567wang 2026-08-24 10/500 2026-08-25 19:15 by lfy8008
[基金申请] 放榜前的不淡定 20+4 snowwithsea 2026-08-19 19/950 2026-08-25 17:57 by chick875
[基金申请] 某些机构,以效率低为荣,以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
[基金申请] 今日不放榜?网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +17 医学老男孩 2026-08-20 22/1100 2026-08-25 15:36 by 医学老男孩
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑,不妨来听听这首《基金之外》 +8 scalable 2026-08-24 8/400 2026-08-25 12:52 by jnhyjjm
[教师之家] 导师吐槽:我怎么摊上了这么个极品研究生! +3 苏东坡二世 2026-08-23 3/150 2026-08-25 10:35 by shisan1313
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +5 process2012 2026-08-23 7/350 2026-08-25 09:42 by huixian257
[基金申请] 今天基金会出结果吗?20260819 +17 kkkl_v 2026-08-19 18/900 2026-08-25 09:41 by windflowerwy
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +25 yaoyewhu2008 2026-08-20 27/1350 2026-08-25 08:01 by Equinoxhua
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +21 koalala 2026-08-24 24/1200 2026-08-24 19:25 by 家与远方
[基金申请] filecode,4个jtjc了 +14 ziyangfang 2026-08-19 17/850 2026-08-24 18:37 by 哈哈蛤?
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +13 kulium 2026-08-21 16/800 2026-08-24 16:27 by superceng
[基金申请] 让我中一个面上吧! +13 大萍1987 2026-08-20 16/800 2026-08-24 10:23 by 太傻了
[基金申请] 时间戳今天,20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
信息提示
请填处理意见