应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 设计了简并引物，PCR扩不出条带
101/1返回列表
查看: 4218  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

wh6125

铁虫 (初入文坛)

[求助] 设计了简并引物，PCR扩不出条带

本人欲克隆一条未知基因，从NCBI上下了几条其他物种上的该基因，应用CODEHOP结合Block Maker设计了几条简并引物，都没有扩出条带。首先确定cDNA是没问题的，已经用Actin验证过；PCR也用了不同的退火温度，还是不出条带。。。那是说明引物的问题了吧，但是真的不知道怎么设计引物了，郁闷死了，有没有高手能帮忙设计引物，或者指点一下也可以，谢谢~~
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

感兴趣的

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-10-31 10:53:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

用户注销 (正式写手)
本帖仅楼主可见
赞一下
2楼2013-11-01 08:32:11
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

lyqifeih

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wh6125: 金币+5, ★有帮助 2013-11-01 09:18:10
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-11-05 11:49:53
您的简并引物有几个不确定的碱基。做不出来原因很多，很多时候是目的引物浓度不够，我以前加了4个，用10uM引物P不出来，后来引物浓度提高10~100倍慢慢就能看到条带。
赞一下 回复此楼
刚进入神经生物和电生理
3楼2013-11-01 08:49:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wh6125

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by lyqifeih at 2013-11-01 08:49:59
您的简并引物有几个不确定的碱基。做不出来原因很多，很多时候是目的引物浓度不够，我以前加了4个，用10uM引物P不出来，后来引物浓度提高10~100倍慢慢就能看到条带。

我问过一个师兄，他说有可能是引物浓度太高，导致引物不能结合模板，PCR中只扩增引物，导致引物条带特别亮。。。这个是应该降低引物浓度还是提高呢？
赞一下 回复此楼
4楼2013-11-01 09:17:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lyqifeih

新虫 (小有名气)
你用什么酶扩增的，普通的Taq聚合酶会存在这个问题，我一般都用hotstart DNA 聚合酶，避免引物扩增。
赞一下 回复此楼
刚进入神经生物和电生理
5楼2013-11-01 09:27:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wh6125

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by lyqifeih at 2013-11-01 09:27:34
你用什么酶扩增的，普通的Taq聚合酶会存在这个问题，我一般都用hotstart DNA 聚合酶，避免引物扩增。

我就用的普通的Mix，设置了各种梯度什么的，引物浓度也试了还是不行，要不也试试这个Hot start，看到Takara有这种Mix
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2013-11-04 19:03:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

留着作为
7楼2015-05-04 15:45:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

竹砚

铜虫 (小有名气)
楼主实验成功了吗？我最近也在试简并引物，用的文献中的引物，但没扩增出来，现在也在自己试着设
赞一下 回复此楼
记得心中的那个梦。
8楼2015-09-29 16:43:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

andywang6137

木虫 (著名写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 竹砚 at 2015-09-29 16:43:16
楼主实验成功了吗？我最近也在试简并引物，用的文献中的引物，但没扩增出来，现在也在自己试着设

你用的是codehop设计的简并引物不？结果怎么样？
赞一下 回复此楼
9楼2015-10-26 17:46:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

羽化姚俊鹏

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by andywang6137 at 2015-10-25 21:46:07
你用的是codehop设计的简并引物不？结果怎么样？...

冒昧问一下，进行blockmake的氨基酸序列，您是怎么选择的？
赞一下 回复此楼
志同道合
10楼2016-08-11 16:36:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 wh6125 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 jCd0dEvKHShX 2026-08-29 4/200 2026-08-30 13:54 by GkCVyODlx4mR
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +6 德尚中行 2026-08-27 7/350 2026-08-30 12:53 by Bxndjjd
[找工作] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 8/400 2026-08-30 12:14 by l0VvVHGBGRLv
[论文投稿] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 7/350 2026-08-30 11:51 by l0VvVHGBGRLv
[公派出国] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +6 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 8/400 2026-08-30 11:32 by l0VvVHGBGRLv
[找工作] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 9/450 2026-08-30 11:19 by l0VvVHGBGRLv
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +5 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 6/300 2026-08-30 11:18 by l0VvVHGBGRLv
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见（F口面上） +6 gdd2018 2026-08-28 11/550 2026-08-30 08:58 by 超级无敌华子
[考博] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 G6APbkg8SA6w 2026-08-29 4/200 2026-08-30 07:28 by ZPa0EcMwuECS
[硕博家园] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 5/250 2026-08-30 06:55 by ZPa0EcMwuECS
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 4/200 2026-08-30 02:09 by ZPa0EcMwuECS
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +5 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 6/300 2026-08-30 01:58 by ZPa0EcMwuECS
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 5/250 2026-08-30 01:03 by ZPa0EcMwuECS
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗？ +4 349506619 2026-08-28 4/200 2026-08-29 22:41 by alongwaytogo
[基金申请] 为什么到现在没收到通知？ +4 tannykie 2026-08-29 4/200 2026-08-29 17:14 by lmz0216
[基金申请] 系统查不到 +11 董八千 2026-08-26 11/550 2026-08-28 18:06 by Leogzhya
[基金申请] 哪位高人中了，把查询到的截图贴出来让我看看，让我长长见识 +5 yuleib84 2026-08-26 6/300 2026-08-28 00:02 by yudaoqian88
[文学芳草园] 梦想 +3 myrtle 2026-08-26 3/150 2026-08-27 10:01 by angelyueyi
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜？ 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 我不理解！ +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭