24小时热门版块排行榜    

查看: 4221  |  回复: 9
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

wh6125

铁虫 (初入文坛)

[求助] 设计了简并引物,PCR扩不出条带

本人欲克隆一条未知基因,从NCBI上下了几条其他物种上的该基因,应用CODEHOP结合Block Maker设计了几条简并引物,都没有扩出条带。首先确定cDNA是没问题的,已经用Actin验证过;PCR也用了不同的退火温度,还是不出条带。。。那是说明引物的问题了吧,但是真的不知道怎么设计引物了,郁闷死了,有没有高手能帮忙设计引物,或者指点一下也可以,谢谢~~
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

感兴趣的

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

羽化姚俊鹏

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
9楼: Originally posted by andywang6137 at 2015-10-25 21:46:07
你用的是codehop设计的简并引物不?结果怎么样?...

冒昧问一下,进行blockmake的氨基酸序列,您是怎么选择的?
志同道合
10楼2016-08-11 16:36:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

匿名

用户注销 (正式写手)

本帖仅楼主可见
2楼2013-11-01 08:32:11
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

lyqifeih

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wh6125: 金币+5, 有帮助 2013-11-01 09:18:10
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-11-05 11:49:53
您的简并引物有几个不确定的碱基。做不出来原因很多,很多时候是目的引物浓度不够,我以前加了4个,用10uM引物P不出来,后来引物浓度提高10~100倍慢慢就能看到条带。
刚进入神经生物和电生理
3楼2013-11-01 08:49:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wh6125

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by lyqifeih at 2013-11-01 08:49:59
您的简并引物有几个不确定的碱基。做不出来原因很多,很多时候是目的引物浓度不够,我以前加了4个,用10uM引物P不出来,后来引物浓度提高10~100倍慢慢就能看到条带。

我问过一个师兄,他说有可能是引物浓度太高,导致引物不能结合模板,PCR中只扩增引物,导致引物条带特别亮。。。这个是应该降低引物浓度还是提高呢?
4楼2013-11-01 09:17:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[论文投稿] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 G6APbkg8SA6w 2026-08-29 5/250 2026-08-30 19:01 by hZiFeudZyoGR
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 G6APbkg8SA6w 2026-08-29 4/200 2026-08-30 18:53 by hZiFeudZyoGR
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 G6APbkg8SA6w 2026-08-29 5/250 2026-08-30 18:40 by hZiFeudZyoGR
[博后之家] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 4/200 2026-08-30 18:28 by hZiFeudZyoGR
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 7/350 2026-08-30 17:45 by hZiFeudZyoGR
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +6 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 7/350 2026-08-30 17:14 by hZiFeudZyoGR
[考博] 找导师 +6 yuanjiabao 2026-08-29 7/350 2026-08-30 14:40 by 生科新手
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +6 德尚中行 2026-08-27 7/350 2026-08-30 12:53 by Bxndjjd
[基金申请] 国社科又开始会评了,不知道这次命运如何 +3 雨打竹帘 2026-08-30 4/200 2026-08-30 12:35 by 白大多亮
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 8/400 2026-08-30 12:03 by l0VvVHGBGRLv
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见(F口面上) +6 gdd2018 2026-08-28 11/550 2026-08-30 08:58 by 超级无敌华子
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已,这评审意见是按照杰青的条件评的吧? +6 gouxfjh 2026-08-28 11/550 2026-08-30 07:57 by gouxfjh
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +6 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 11/550 2026-08-30 06:00 by ZPa0EcMwuECS
[基金申请] 国社科申报系统有变化 +3 kynobel 2026-08-23 3/150 2026-08-29 21:57 by 余韵清
[基金申请] 怎么查啊 +6 huang1991js 2026-08-26 6/300 2026-08-28 08:42 by winsaint
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件,有关系吗? +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 国合现在查不到了吗? +10 chengyan1220 2026-08-24 20/1000 2026-08-26 08:57 by peasantsprig
[基金申请] 牛来!米来!面来! +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
信息提示
请填处理意见