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风雨山林

金虫 (小有名气)

[交流] 基因PCR结果图分析 已有4人参与

大家好，我最近做试验，基因pcr，出现的图有点奇怪，想咨询一下，我要将提取的质粒基因组与引物pcr，看看我的基因转进去了吗，可是pcr图出现了还多条带，而且不是在下面，还是在上面，帮忙分析一下
基因PCR结果图分析
Administrator 2013-10-10 17hr 00min.jpg
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1楼 2013-10-14 10:33:02
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jonathan1983

铁虫 (小有名气)
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kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-10-14 11:19:15
不知道你的目的基因是多大？这个图上的一堆亮东西貌似是引物二聚体(⊙o⊙)哦。PCR时模板浓度不宜过高，提出来后建议稀释几十倍再用。
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2楼2013-10-14 10:55:54
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wlwsj2009

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
2楼: Originally posted by jonathan1983 at 2013-10-14 10:55:54
不知道你的目的基因是多大？这个图上的一堆亮东西貌似是引物二聚体(⊙o⊙)哦。PCR时模板浓度不宜过高，提出来后建议稀释几十倍再用。

最好调整一下模板浓度，还有引物的浓度，模板做50,100,倍稀释试一下。

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3楼2013-10-14 11:16:50
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风雨山林

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by jonathan1983 at 2013-10-14 10:55:54
不知道你的目的基因是多大？这个图上的一堆亮东西貌似是引物二聚体(⊙o⊙)哦。PCR时模板浓度不宜过高，提出来后建议稀释几十倍再用。

我的基因在700-1000bp左右，应该在marker范围内，模板浓度不高啊
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4楼2013-10-16 08:50:34
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风雨山林

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by wlwsj2009 at 2013-10-14 11:16:50
最好调整一下模板浓度，还有引物的浓度，模板做50,100,倍稀释试一下。
...

亮的东西我不需要，我需要1000bp左右的条带，我疑问的是上面的条带是怎么回事，不应该有啊
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5楼2013-10-16 08:58:52
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zr281069

银虫 (小有名气)
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你这果断是二聚体 看 每条点都有害这么亮
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人物
6楼2013-10-16 11:04:18
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jonathan1983

铁虫 (小有名气)
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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-10-17 10:17:20
引用回帖:
4楼: Originally posted by 风雨山林 at 2013-10-16 08:50:34
我的基因在700-1000bp左右，应该在marker范围内，模板浓度不高啊...

你说的模板浓度不高，我不知道在什么范围内。一般我提取基因组DNA后先把模板取出部分，稀释50倍左右再当模板。其次，PCR出不来跟Tm关系很大，不清楚你的温度选的多少，一般要低于Tm值5度左右
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7楼2013-10-17 10:15:33
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风雨山林

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by jonathan1983 at 2013-10-17 10:15:33
你说的模板浓度不高，我不知道在什么范围内。一般我提取基因组DNA后先把模板取出部分，稀释50倍左右再当模板。其次，PCR出不来跟Tm关系很大，不清楚你的温度选的多少，一般要低于Tm值5度左右...

这是已经摸好的条件，基因已经P出来了，我是想把这个基因转到其他的菌里去，我电转化后把菌提质粒，没看到转进去的基因，看到了上面的条带，所以想问一下上面的条带是什么
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8楼2013-10-21 20:01:46
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jonathan1983

铁虫 (小有名气)
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8楼: Originally posted by 风雨山林 at 2013-10-21 20:01:46
这是已经摸好的条件，基因已经P出来了，我是想把这个基因转到其他的菌里去，我电转化后把菌提质粒，没看到转进去的基因，看到了上面的条带，所以想问一下上面的条带是什么...

上面的条带我也不清楚。遇到这种情况我会重新提一次再看看什么结果
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9楼2013-10-23 11:37:27
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1106064361

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
其实根据经验，你这应该都是二聚体！
真要是装上去了，质粒PCR会很亮的！
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10楼2013-10-23 17:29:23
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