应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助PCR结果分析~~~
51/1返回列表
查看: 1625  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

xiaowo1127

铜虫 (初入文坛)

[交流] 求助PCR结果分析~~~

请问各位大侠，为什么我的PCR结果是这样的。每次P完的结果都是有两条条带，我这样的结果，应该怎样进行改正才能P出完美的结果呢，请各位高手指教~~~
这个是我的PCR条件：
预变性94℃ 5min  
30个循环 94℃ 30s、 55℃ 30s 、72℃ 30s   
最后的延伸72℃ 5min
PCR反应体系：20uL
Taq酶：0.1 uL
10*PCR buffer：2uL
dNTP：0.5uL
引物各0.5uL
DNA：0.5 uL  
剩下的用双蒸水补全
求助PCR结果分析~~~
IMG_0421111111.JPG
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2013-09-17 20:23:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

renzhiq

木虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
xiaowo1127: 金币+1 2013-11-06 19:46:36
你的结果是一条带，下面的那条是引物二聚体。你要是想去除的话你适当的提升退火温度，另外你的dNTP量加少了，至少加到1.6ul。祝实验顺利！
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2013-09-18 11:17:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

yilunanxia

金虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-09-18 10:23:27
xiaowo1127: 金币+1 2013-11-06 19:43:45
最下面一行可以无视存在，当然如果楼主想要去除下面的条带的话可以尝试一下降低引物和dNTP的浓度。
赞一下 回复此楼
2楼2013-09-17 21:26:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bujunyang

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流！ 2013-09-18 10:23:35
xiaowo1127: 金币+5 2013-11-06 19:44:05
最下面的一条带一般是引物二聚体或非特异带。当你需要某个目的片段时，引物的选择是受到限制的，因此往往我们用的引物回存在形成二聚体、二级结构等很多问题。我不明白你做pcr是为了获得一个目的片段呢还是为了得到一个perfect的图片？
赞一下 回复此楼
3楼2013-09-17 21:33:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lvshilu

新虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流！ 2013-09-18 10:23:42
你好！我的几点建议，敬请参考：
1. 调整模板的量，建议：稀释10被，100倍；或者增加1倍，2倍，5倍，10倍。你的问题是目的条带较浅，而不是后面的引物二聚体。
2. 做TM梯度，怀疑你的TM较高，但有时也说不准，实验嘛做了才知道，可以做TM梯度。
赞一下 回复此楼
5楼2013-09-18 09:29:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
简单回复
廖志琴lzq4楼
2013-09-18 08:17   回复  
引用回帖:
3楼: Originally posted by bujunyang at 2013-09-17 21:33:33 最下面的一条带一般是引物二聚体或非特异带。当你需要某个目的片段时，引物的选择是受到限制的，因此往往我们用的引物回存在形成二聚体、二级结构等很多问题。我不明白你做pcr是为了获得一个目的片段呢还是为了得到 ...

查看全部 9 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +9 majunge000 2026-08-10 11/550 2026-08-13 10:40 by ZH远山
[基金申请] 重要来源：本周末出结果 +9 瞬息宇宙 2026-08-12 9/450 2026-08-13 10:12 by Vivilian
[基金申请] 结合人工智能，周易传统文化，filecode打分制来了，3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 好奇怪的filecode +5 布布和一二 2026-08-08 6/300 2026-08-12 16:11 by 云上清扬
[基金申请] filecode +13 documentary 2026-08-10 15/750 2026-08-12 15:56 by 云上清扬
[论文投稿] 职称评审，求友友推荐见刊最快的期刊 +4 工厂打螺丝 2026-08-08 4/200 2026-08-12 09:18 by hansi2025
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的，真有人买论文么？感觉没必要啊 +8 Tide man 2026-08-10 9/450 2026-08-11 20:39 by beefly
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 什么时候出结果，有咨询渠道？？？ +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 基金中了 +15 laoda193707 2026-08-06 15/750 2026-08-11 00:11 by jiafei2190
[基金申请] 关于代码变化问题，想知道的进来 +17 且听虎啸 2026-08-07 24/1200 2026-08-10 18:35 by zhangduo2008
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +9 布布和一二 2026-08-08 9/450 2026-08-10 11:22 by xxxx2020
[基金申请] fileCode有新解读？ +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
[基金申请] 关于filecode，很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
[基金申请] 关于豆爷回答的JTJC与%2F数量 +5 yang182083 2026-08-06 7/350 2026-08-08 18:29 by zhanghaozhu
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制，评价高的钱多评价低的钱少，但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变，有变的大神么？ +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
[基金申请] filecode +14 等待解的谜 2026-08-06 19/950 2026-08-07 12:20 by wlwhappy
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭