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jannet0301

木虫 (小有名气)

ds

[求助] 【新手求助】:pcr 条带弥散

从土壤里提取的细菌总DNA,对16s 全长进行pcr

50μL体系:
模板:           5
正反引物:各1
exTaq酶:    0.25
dNTP:          4
buffer:         5
水:           33.75

条件:
94℃         45s
55℃         30s
72℃        90s   
  35个循环

体系和条件都是根据文献来的。
跑出来的图,有杂带弥散,求助!
大榭!
【新手求助】:pcr 条带弥散
2013-09-14_17-53-27_306.jpg

[ Last edited by jannet0301 on 2013-9-15 at 18:05 ]
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人生人不爱我我自爱
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yimingwang

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰,手有余香。分子生物期待你更多精彩 。 2013-09-17 14:47:37
酶不行,仔细看看文献里用的啥酶,多查几篇。一般会用两种酶扩增。第一次用非特异性不高的,第二次用特异性高的。
Let'sdoit.
2楼2013-09-15 23:52:08
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一苇杭之xmc

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-10-29 23:56:34
看你的扩增产物亮度很亮啊。可以试试看降低体系中模板的量,我一般用2微升,并且可以讲模板稀释20,50,100倍,做一下梯度实验对比。或者就是降落pcr。这是我的经验。
欲速则不达
3楼2013-10-29 21:56:33
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一苇杭之xmc

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

对啦,如果不做降落的话,还可以提高退火温度试试看。
欲速则不达
4楼2013-10-29 21:58:04
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