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celtlxx

铜虫 (初入文坛)

[求助] 菌落pcr 16s扩增

请问下大家,小弟我做16s扩增,菌落pcr。在扩增后跑电泳,发现有时条带有拖尾现象,但是阴性对照没有条带。送去测序后,发现有时有套峰,叠峰现象。我的16s加样等操作均在超净台中进行。请大家帮忙下,到底是哪里出问题啊。
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yimingwang

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰,手有余香。分子生物期待你更多精彩 。 2013-09-09 20:16:14
是否因为菌落不纯?
另一个原因可能是酶和buffer的问题。调整Mg含量,或者换个酶和buffer看看有没有改进。
Let'sdoit.
2楼2013-09-09 16:20:53
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celtlxx

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by yimingwang at 2013-09-09 16:20:53
是否因为菌落不纯?
另一个原因可能是酶和buffer的问题。调整Mg含量,或者换个酶和buffer看看有没有改进。

可能是菌落问题吧,但是菌落已经都是单菌落了。如果是酶问题,那阴性对照应该有条带,但是我的阴性对照没有条带啊。
3楼2013-09-10 15:51:39
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