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hihe99银虫 (小有名气)
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[求助]
race pcr问题，没有特异性条带
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生手做race，5'时两次扩增，跑出来的图没有特异性产物，巢氏扩增的第二次结果更是奇怪，都从胶孔开始弥散了，求前辈们指点 图中，1，2，3是第一次扩增，3是阴性对照 4～8是第二次扩增，8是阴性对照，4，6模板分别是1，2；5，7模板是稀释20倍的1，2  1.jpg |
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 RACE |
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【答案】应助回帖
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kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-09-04 15:22:40
hihe99: 金币+3, ★★★很有帮助 2013-09-05 14:40:44
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-09-04 15:22:40
hihe99: 金币+3, ★★★很有帮助 2013-09-05 14:40:44
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首先建议你用试剂盒自带的验证系统看看是不是整个系统工作正常.因为你没说用的是什么试剂盒,不同的试剂盒效率也不近相同,碰到问题的时候验证一下系统会比较有信心.3''RACE好做,但是5'RACE对扩增用的taq酶要求也很高,你要确保系统每一部分工作都正常. 其次要看看反转录本身有没有问题.可以拿个长点的基因来验证一下. 再次是不是你设计的引物不是太合适作RACE? 或者说你设计的退货温度比较低而实际用的退货温度比较高?如果有3'引物,并且和5'的引物有overlap, 可以扩增一下,看看引物是否可用,反转录是否成功. |
3楼2013-09-04 08:14:02
hihe99
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2楼2013-09-03 19:42:37
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4楼2013-09-04 13:49:07
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5楼2013-09-04 14:00:04
