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susan_lulu

新虫 (初入文坛)

[求助] 酶切后电泳条带发生了弥散

各位虫友,我用Sma I酶切PCR产物,30度切了2小时,结果产物跑完电泳后发现条带发生了弥散,请问是什么原因呢?上图是酶切前产物电泳,下图是酶切后的产物电泳图。
酶切后电泳条带发生了弥散
川贝母20130723(特异引物,未酶切)57度.jpg


酶切后电泳条带发生了弥散-1
川贝母20130723(特异引物,酶切)57度.jpg
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chlorella409

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
目测有可能是降解了
2楼2013-08-15 13:49:16
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susan_lulu

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by chlorella409 at 2013-08-15 13:49:16
目测有可能是降解了

我是刚P完就进行酶切了,没有过夜,这样也会降解吗
3楼2013-08-15 15:26:58
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chlorella409

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
susan_lulu: 金币+3, ★★★很有帮助 2013-08-19 16:17:59
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助! 2013-08-19 17:09:17
引用回帖:
3楼: Originally posted by susan_lulu at 2013-08-15 15:26:58
我是刚P完就进行酶切了,没有过夜,这样也会降解吗...

因为你是30度酶切的,温度较高,如果管子不干净或者操作不当会从外界带入核酸酶,一般用限制性内切酶都是16度酶切,时间延长
4楼2013-08-19 10:37:47
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跳舞的骆驼

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
susan_lulu: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-08-19 16:18:09
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-08-19 17:09:24
酶切的温度是37度,一般酶的说明书中有交待的。另外,PCR产物酶切肯定没有质粒酶切的好,出现了弥散现象很正常的,我以前也是这么偷懒作的,胶回收后得到的片断,再进行连接转化,得到的转化子比正常的少得多,不过可以省去很多步骤。
5楼2013-08-19 12:33:21
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susan_lulu

新虫 (初入文坛)

刚仔细看过,我买的SmaI说明书中写的最适温度是25度,改天用25度切切试试,估计弥散可能就会不出现了,谢谢楼上的两位
6楼2013-08-19 16:17:35
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双鱼座的瓶盖

金虫 (小有名气)

酶切时候跑胶用的是什么浓度的胶?多大电压,多长时间?

发自小木虫IOS客户端
7楼2016-06-15 09:04:14
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