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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 酶切后电泳条带发生了弥散
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susan_lulu

新虫 (初入文坛)

[求助] 酶切后电泳条带发生了弥散

各位虫友，我用Sma I酶切PCR产物，30度切了2小时，结果产物跑完电泳后发现条带发生了弥散，请问是什么原因呢？上图是酶切前产物电泳，下图是酶切后的产物电泳图。
酶切后电泳条带发生了弥散
川贝母20130723（特异引物，未酶切）57度.jpg


酶切后电泳条带发生了弥散-1
川贝母20130723（特异引物，酶切）57度.jpg
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1楼 2013-08-15 11:26:07
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chlorella409

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
目测有可能是降解了
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2楼2013-08-15 13:49:16
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susan_lulu

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by chlorella409 at 2013-08-15 13:49:16
目测有可能是降解了

我是刚P完就进行酶切了，没有过夜，这样也会降解吗
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3楼2013-08-15 15:26:58
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chlorella409

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
susan_lulu: 金币+3, ★★★很有帮助 2013-08-19 16:17:59
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-08-19 17:09:17
引用回帖:
3楼: Originally posted by susan_lulu at 2013-08-15 15:26:58
我是刚P完就进行酶切了，没有过夜，这样也会降解吗...

因为你是30度酶切的，温度较高，如果管子不干净或者操作不当会从外界带入核酸酶，一般用限制性内切酶都是16度酶切，时间延长
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4楼2013-08-19 10:37:47
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跳舞的骆驼

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
susan_lulu: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-08-19 16:18:09
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-08-19 17:09:24
酶切的温度是37度，一般酶的说明书中有交待的。另外，PCR产物酶切肯定没有质粒酶切的好，出现了弥散现象很正常的，我以前也是这么偷懒作的，胶回收后得到的片断，再进行连接转化，得到的转化子比正常的少得多，不过可以省去很多步骤。
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5楼2013-08-19 12:33:21
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susan_lulu

新虫 (初入文坛)
刚仔细看过，我买的SmaI说明书中写的最适温度是25度，改天用25度切切试试，估计弥散可能就会不出现了，谢谢楼上的两位
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6楼2013-08-19 16:17:35
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双鱼座的瓶盖

金虫 (小有名气)
酶切时候跑胶用的是什么浓度的胶？多大电压，多长时间？

发自小木虫IOS客户端
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7楼2016-06-15 09:04:14
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