应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 提取的RNA样本，经过DNA酶处理，但总是处理不干净
51/1返回列表
查看: 3411  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

达菲鸭

新虫 (初入文坛)

[求助] 提取的RNA样本，经过DNA酶处理，但总是处理不干净

我们用qiagen的试剂盒提取了弧菌的RNA，然后用fermentas的cDNA试剂盒里面的DNA酶和buffer来去除gDNA。但是处理后的RNA经PCR检测竟然还是P出了目的产物，这会影响后面的qPCR。

我们以前做过几次，没有遇到这个问题啊，以前都是P不出来的。

可能是RNA的样品中的杂质影响了dna酶的工作么？因为我们后来换了一家的国产的试剂盒同样没有处理干净。这一次提的RNA，有几管的260/280,260/230都在2.1在2.1左右，应该还比较纯吧，但也还是除不干净DNA。

有没有谁知道是什么原因吗？求赐教，十分感谢！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-07-21 13:10:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

达菲鸭

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-21 21:15:10
的确一般是这么加的，可能你的样品的DNA含量比较多，试试增加一点。...

额，我把DNA酶的量x2和x3以后来处理，结果还是P出来了，
赞一下 回复此楼
6楼2013-07-22 18:01:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-07-21 23:10:07
可能是样品太多，酶加少了。DNase消化要根据样品的量来做，可以参考酶的说明书。
赞一下 回复此楼
2楼2013-07-21 14:23:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yilunanxia

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
达菲鸭(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你的更多精彩。 2013-07-22 20:10:37
PCR出了目标条带就是说你的RNA里有DNA了，加大DNase吧
赞一下 回复此楼
3楼2013-07-21 16:07:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

达菲鸭

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-21 14:23:56
可能是样品太多，酶加少了。DNase消化要根据样品的量来做，可以参考酶的说明书。

啊，fermentas的试剂盒说的是1μg的RNA不要使用超过1个单位的DNA酶，然后我就是按这个量加的。难道应该把酶的量再加大一些吗？
赞一下 回复此楼
4楼2013-07-21 18:15:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 FChKX8meu1ds 2026-11-09 8/400 2026-11-11 17:11 by TgvkbZZl9tqB
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 FChKX8meu1ds 2026-11-09 6/300 2026-11-11 17:09 by TgvkbZZl9tqB
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 FChKX8meu1ds 2026-11-09 6/300 2026-11-11 17:03 by TgvkbZZl9tqB
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 0TEMgxdT1eIw 2026-11-09 7/350 2026-11-11 16:52 by TgvkbZZl9tqB
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 C6CRn66RYYXS 2026-11-10 4/200 2026-11-11 14:24 by cdqGD6ftHmbl
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 C6CRn66RYYXS 2026-11-10 3/150 2026-11-11 14:18 by cdqGD6ftHmbl
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 FChKX8meu1ds 2026-11-09 5/250 2026-11-11 14:02 by cdqGD6ftHmbl
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +5 FChKX8meu1ds 2026-11-09 6/300 2026-11-11 13:53 by cdqGD6ftHmbl
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 cqv1zKnzd7hr 2026-11-09 5/250 2026-11-11 13:42 by cdqGD6ftHmbl
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 czAiolzR0IJC 2026-11-10 3/150 2026-11-11 12:05 by gRND4NVAZ8VG
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 YHiw1gou1Eda 2026-11-10 3/150 2026-11-11 11:10 by 1Nb0IVlmV6v0
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 cqv1zKnzd7hr 2026-11-09 6/300 2026-11-11 10:26 by 1Nb0IVlmV6v0
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 zSbvVX9JFl9J 2026-11-09 6/300 2026-11-11 07:06 by Z7qfCsdIiD1T
[考博] 申请环境，微生物方向博士 +3 浅笑09 2026-11-08 3/150 2026-11-10 12:44 by 可淡不可忘
[文学芳草园] 厉娜 +3 张丹枫1991 2026-11-09 5/250 2026-11-09 16:53 by 张丹枫1991
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +6 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 14/700 2026-11-09 11:52 by GwrQVVR6Oenx
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 12/600 2026-11-09 06:32 by l48hFd8Nwae2
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 8/400 2026-11-09 00:14 by l48hFd8Nwae2
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 10/500 2026-11-06 16:12 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +6 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 12/600 2026-11-06 16:10 by 5sJFDKp2kwuI
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭