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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 酵母基因组DNA中的RNA怎么去除不掉？
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melaniqiuqiu

铜虫 (初入文坛)

[求助] 酵母基因组DNA中的RNA怎么去除不掉？

近日在做酵母基因组DNA的提取，提取的DNA用分光光度计检测A260/A280=1.91，琼脂糖凝胶检测小于100bp处有很亮的条带，怀疑是RNA，用终浓度100μg/ml的RNAase37℃处理2h,再跑胶仍有该条带，请教这是什么原因啊？

20121218yeastDNA.jpg
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一句承诺，一生执着
1楼2012-12-20 10:13:22
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
melaniqiuqiu: 金币+1, ★有帮助 2012-12-20 15:56:18
应该不会出现这种情况，加RNAase半小时基本就能除干净。你放冰箱过夜再电泳试试。
一般即使不加RNAase，过一两天，RNA自己也会降解，因为RNAase无处不在。
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Thank-you，so-blue.
2楼2012-12-20 14:30:09
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melaniqiuqiu

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by susizheng at 2012-12-20 14:30:09
应该不会出现这种情况，加RNAase半小时基本就能除干净。你放冰箱过夜再电泳试试。
一般即使不加RNAase，过一两天，RNA自己也会降解，因为RNAase无处不在。

感谢回复。再请教有没有可能是RNAase失效，或者那个亮条带不是RNA？
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一句承诺，一生执着
3楼2012-12-20 15:05:29
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xiangyubaoer

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
楼上说的RNAase无处不在，的确..不过按说去除RNA是在提DNA中的一步
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4楼2012-12-20 15:23:49
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
引用回帖:
3楼: Originally posted by melaniqiuqiu at 2012-12-20 15:05:29
感谢回复。再请教有没有可能是RNAase失效，或者那个亮条带不是RNA？...

图中的最下端亮带应该是RNA无误，
RNAase失效也有这个可能。
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Thank-you，so-blue.
5楼2012-12-20 15:50:57
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melaniqiuqiu

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by susizheng at 2012-12-20 15:50:57
图中的最下端亮带应该是RNA无误，
RNAase失效也有这个可能。...

6楼2012-12-20 15:53:49
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mguo15

银虫 (小有名气)
你的电泳有没加RNase的对照码？RNase 很稳定，一般不会失活。如果不行，超离心可简单分离。
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7楼2012-12-21 08:54:52
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melaniqiuqiu

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by mguo15 at 2012-12-21 08:54:52
你的电泳有没加RNase的对照码？RNase 很稳定，一般不会失活。如果不行，超离心可简单分离。

加RNase和没加的没有什么区别~感觉RNase没发挥作用~用的是基因组提取试剂盒里自带的RNase,-20℃保存的，不知道为啥不起作用。
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一句承诺，一生执着
8楼2012-12-21 13:11:06
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melaniqiuqiu

铜虫 (初入文坛)
近日把DNA原液稀释5倍后进行RNAase处理，跑胶显示RNA基本已被去除
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一句承诺，一生执着
9楼2013-01-07 14:16:06
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776142

金虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by melaniqiuqiu at 2013-01-07 14:16:06
近日把DNA原液稀释5倍后进行RNAase处理，跑胶显示RNA基本已被去除

遇到一样的问题  哎  我的OD值都快2.1了  就是除不掉
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10楼2013-06-18 14:49:46
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