应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 用DNaseⅠ处理RNA中混有的DNA后续操作如何进行？
171/2返回列表12下一页
查看: 2874  |  回复: 16
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

zhouxw1987

铁虫 (初入文坛)

[求助] 用DNaseⅠ处理RNA中混有的DNA后续操作如何进行？ 已有1人参与

用Trizol抽提水稻叶片RNA，电泳检测后发现有很多的DNA污染，打算用DNaseⅠ进行处理除去残留的DNA。DNaseⅠ说明书上说的是处理完后可以用RNA纯化试剂盒进行纯化（这个试剂盒实验室没有，所以不用该方法），或者加入一定量的EDTA终止反应并65℃加热10min，但这种方法会有残留有各种离子。现在我想问的是：这个EDTA是如何配制才能保证不含有RNase，同时残留的各种离子是否会对后续的反转录和RT-PCR有影响？？或者可否不用EDTA，而直接将DNaseⅠ处理的RNA溶液80℃处理10min以便去除DNaseⅠ（网上显示该酶在80摄氏度处理10分钟后将永久灭活）。
请问大家是如何处理RNA中混有的DNA呢？？谢谢各位了·····
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-09-16 11:05:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流经验，热心应助 2012-09-17 13:56:02
嗯.................
       是这样的，用EDTA终止法并加热，我们实验室一般不用，因为我们认为若是有一点残留RNAse的话，65度下10min是非常危险的。所以一般灭活法采用酚氯仿抽提两次，然后醇低温沉淀回收RNA。具体使用方法请移步至：
       http://www.takara.com.cn/explain/B/D2270A.pdf
赞一下(2人) 回复此楼
Let God do with it as He wills
3楼2012-09-16 12:21:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

gwd0312

木虫 (正式写手)

“无冕之王”

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你买的专门去除DNA的试剂盒里就有啊！
赞一下 回复此楼
持之以恒、永不放弃！
2楼2012-09-16 11:17:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhouxw1987

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gwd0312 at 2012-09-16 11:17:06
你买的专门去除DNA的试剂盒里就有啊！

里面没有EDTA，那个貌似要自己配的····
赞一下 回复此楼
4楼2012-09-16 15:28:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhouxw1987

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by atlanticwi at 2012-09-16 12:21:40
嗯.................
       是这样的，用EDTA终止法并加热，我们实验室一般不用，因为我们认为若是有一点残留RNAse的话，65度下10min是非常危险的。所以一般灭活法采用酚氯仿抽提两次，然后醇低温沉淀回收RNA。具 ...

我去看看，万分感谢····
赞一下 回复此楼
5楼2012-09-16 15:29:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhouxw1987

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by atlanticwi at 2012-09-16 12:21:40
嗯.................
       是这样的，用EDTA终止法并加热，我们实验室一般不用，因为我们认为若是有一点残留RNAse的话，65度下10min是非常危险的。所以一般灭活法采用酚氯仿抽提两次，然后醇低温沉淀回收RNA。具 ...

谢谢，不过貌似这里面也有同一个问题，那就是3M的醋酸钠如何配制？？？这个应该也是要无RNase的吧？？？
赞一下 回复此楼
6楼2012-09-16 15:36:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气
引用回帖:
6楼: Originally posted by zhouxw1987 at 2012-09-16 15:36:46
谢谢，不过貌似这里面也有同一个问题，那就是3M的醋酸钠如何配制？？？这个应该也是要无RNase的吧？？？...

嗯........................
       肯定需要无RNase的，具体处理应该使用DEPC，你可以问问经常手提RNA的师兄师姐，这个要加多少合适我已经忘了，好久都没做了。
赞一下 回复此楼
Let God do with it as He wills
7楼2012-09-16 18:00:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

272401213

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
据说invitrogen的产品~只要加进去，让消化就好了，消化完直接可以用！无需其他处理！不过貌似有点小贵
赞一下 回复此楼
YNWA
8楼2012-09-17 07:38:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wanghh_lzu

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
takara上有DNAase的说明书，我们实验室用DEPC水配的EDTA和NaAC   配完灭菌 分装,再根据说明书上的步骤走就可以了 效果一直不错
赞一下 回复此楼
9楼2012-09-17 09:56:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhouxw1987

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by wanghh_lzu at 2012-09-17 09:56:19
takara上有DNAase的说明书，我们实验室用DEPC水配的EDTA和NaAC   配完灭菌 分装,再根据说明书上的步骤走就可以了 效果一直不错

好吧，谢谢！不过我想问问这个DEPC水，是经过高压处理后的，还是直接新配的？另外NaAC和EDTA高压灭菌后不会对药品本身性质有影响么？？？谢谢·····
赞一下 回复此楼
10楼2012-09-17 20:38:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 zhouxw1987 的主题更新
171/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +6 koalala 2026-08-24 6/300 2026-08-24 08:21 by 正能量1斤
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +11 kulium 2026-08-21 14/700 2026-08-24 02:12 by 流流伤
[基金申请] 让我中一个面上吧！ +12 大萍1987 2026-08-20 15/750 2026-08-23 20:44 by 大萍1987
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +7 且听虎啸 2026-08-17 8/400 2026-08-22 21:55 by 医学老男孩
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +24 yaoyewhu2008 2026-08-20 26/1300 2026-08-22 17:43 by kammury
[基金申请] filecode，4个jtjc了 +13 ziyangfang 2026-08-19 16/800 2026-08-22 17:08 by WH3796
[基金申请] 人气不行了 +8 fansofjerry 2026-08-21 8/400 2026-08-22 16:30 by zyqchem
[基金申请] 今天基金会出结果吗？20260819 +16 kkkl_v 2026-08-19 17/850 2026-08-22 16:12 by 阿布Abu
[基金申请] 时间戳今天，20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 今日不放榜？网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +16 医学老男孩 2026-08-20 20/1000 2026-08-21 21:13 by Ldrop2023
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +7 angus9576 2026-08-17 12/600 2026-08-21 13:38 by weiyin
[基金申请] 我面上完蛋了 +7 且听虎啸 2026-08-20 8/400 2026-08-21 12:31 by 酷酷墨镜
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧？ +4 哈哈蛤？ 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[论文投稿] 投稿咨询 +5 wwm09 2026-08-17 7/350 2026-08-21 10:11 by 期刊论文帮手
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
[基金申请] 估计是周四 +3 archvillain 2026-08-18 3/150 2026-08-21 01:48 by jnhyjjm
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 明天放榜？ +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭