| 查看: 2225 | 回复: 16 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
用DNaseⅠ处理RNA中混有的DNA后续操作如何进行？已有1人参与
|
||
|
用Trizol抽提水稻叶片RNA，电泳检测后发现有很多的DNA污染，打算用DNaseⅠ进行处理除去残留的DNA。DNaseⅠ说明书上说的是处理完后可以用RNA纯化试剂盒进行纯化（这个试剂盒实验室没有，所以不用该方法），或者加入一定量的EDTA终止反应并65℃加热10min，但这种方法会有残留有各种离子。现在我想问的是：这个EDTA是如何配制才能保证不含有RNase，同时残留的各种离子是否会对后续的反转录和RT-PCR有影响？？或者可否不用EDTA，而直接将DNaseⅠ处理的RNA溶液80℃处理10min以便去除DNaseⅠ（网上显示该酶在80摄氏度处理10分钟后将永久灭活）。 请问大家是如何处理RNA中混有的DNA呢？？谢谢各位了····· |
回复此楼» 猜你喜欢
为什么蛋白质氨基酸测定大家都测17种?
已经有5人回复
-
《灰分记：我与坩埚的“灰烬”之恋》
已经有3人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有52人回复
-
求助 食品检验工（基础知识），中国劳动社会出版社 电子版
已经有5人回复
-
胶体几丁质的结晶度？
已经有0人回复
-
诚挚招收全日制博士！！！中国农业科学院麻类研究所谭志坚研究员课题组招收博士
已经有2人回复
-
三甲基羟乙基丙二胺的合成路线
已经有5人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
DNA/RNA抽提操作中用到的carrier RNA的分类、作用、原理？
已经有5人回复- RNA用DNase 处理后的问题
已经有3人回复
- 【求助/交流】提RNA后用DNase消化后PCR仍有目的条带，该如何避免呢？
已经有13人回复
- 【讨论】（急！！）如何用AMBER模拟RNA/DNA，关键是怎么处理输入文件！！
已经有3人回复
- 【求助/交流】处理RNA中的DNase时所用的DETA或醋酸钠怎么配？
已经有3人回复
- 【求助/交流】关于RNA提取后DNaseⅠ的处理
已经有11人回复
- 【求助/交流】DNase 处理 RNA 的具体步骤（不用试剂盒）
已经有12人回复
wanghh_lzu
银虫 (初入文坛)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 441.2
- 帖子: 34
- 在线: 117.4小时
- 虫号: 1248439
- 注册: 2011-03-29
- 性别: MM
- 专业: 生物化学
9楼2012-09-17 09:56:19
gwd0312
木虫 (正式写手)
“无冕之王”
- MolEPI: 5
- 应助: 131 (高中生)
- 金币: 1973.2
- 红花: 10
- 帖子: 418
- 在线: 88.3小时
- 虫号: 1067565
- 注册: 2010-08-01
- 性别: GG
- 专业: 质谱分析
2楼2012-09-16 11:17:06
atlanticwi
金虫 (正式写手)
琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气
- MolEPI: 25
- 应助: 138 (高中生)
- 金币: 141.2
- 散金: 350
- 红花: 13
- 帖子: 536
- 在线: 313.2小时
- 虫号: 1099992
- 注册: 2010-09-15
- 专业: 植物生理与生化
【答案】应助回帖
★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流经验，热心应助 2012-09-17 13:56:02
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流经验，热心应助 2012-09-17 13:56:02
|
嗯................. 是这样的，用EDTA终止法并加热，我们实验室一般不用，因为我们认为若是有一点残留RNAse的话，65度下10min是非常危险的。所以一般灭活法采用酚氯仿抽提两次，然后醇低温沉淀回收RNA。具体使用方法请移步至： http://www.takara.com.cn/explain/B/D2270A.pdf |
3楼2012-09-16 12:21:40
4楼2012-09-16 15:28:40