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用DNaseⅠ处理RNA中混有的DNA后续操作如何进行？ 已有1人参与
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用Trizol抽提水稻叶片RNA，电泳检测后发现有很多的DNA污染，打算用DNaseⅠ进行处理除去残留的DNA。DNaseⅠ说明书上说的是处理完后可以用RNA纯化试剂盒进行纯化（这个试剂盒实验室没有，所以不用该方法），或者加入一定量的EDTA终止反应并65℃加热10min，但这种方法会有残留有各种离子。现在我想问的是：这个EDTA是如何配制才能保证不含有RNase，同时残留的各种离子是否会对后续的反转录和RT-PCR有影响？？或者可否不用EDTA，而直接将DNaseⅠ处理的RNA溶液80℃处理10min以便去除DNaseⅠ（网上显示该酶在80摄氏度处理10分钟后将永久灭活）。 请问大家是如何处理RNA中混有的DNA呢？？谢谢各位了····· |
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5楼2012-09-16 15:29:28
gwd0312
木虫 (正式写手)
“无冕之王”
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2楼2012-09-16 11:17:06
atlanticwi
金虫 (正式写手)
琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气
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【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流经验，热心应助 2012-09-17 13:56:02
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小丹木木: 金币+2, 鼓励交流经验，热心应助 2012-09-17 13:56:02
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嗯................. 是这样的，用EDTA终止法并加热，我们实验室一般不用，因为我们认为若是有一点残留RNAse的话，65度下10min是非常危险的。所以一般灭活法采用酚氯仿抽提两次，然后醇低温沉淀回收RNA。具体使用方法请移步至： http://www.takara.com.cn/explain/B/D2270A.pdf |
3楼2012-09-16 12:21:40
4楼2012-09-16 15:28:40
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