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bolomeer

铜虫 (小有名气)

[交流] DNA提取过程中的RNA消化

大家好，大家在需要避免RNA干扰的DNA提取过程中通常有多大浓度的RNase A，处理条件和时间是怎样的？我通常用2.5ng/ul的浓度，37度处理1小时，有时去不干净，影响下游检测，但是时间长了又怕把DNA也降解掉，请问有没有更好的条件。
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1楼 2013-06-22 11:01:55
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dcb005

金虫 (著名写手)
★ ★
bolomeer(金币+1): 谢谢参与
myprayer: 金币+1, Gifts of roses, hand there are lingering fragrance. Look forward to your wonderful and more detailed answer. 2013-06-22 16:52:59
10 mg/ml，加入4ul 到一个1.5ml tube里，也就是一个反应体系用4ul
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2楼2013-06-22 12:00:59
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★
bolomeer(金币+1): 谢谢参与
1949stone: 回帖置顶 2013-06-24 08:07:59
RNase的用量取决于样品量的多少，我一般情况下~0.5 μg/μg DNA。用的是DNase-free的RNase，应该不会把DNA降解的。而且一般情况下DNA比RNA要稳定，不加入DNase的话DNA不会那么容易被降解掉的。
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3楼2013-06-22 17:20:24
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Science298

铜虫 (正式写手)
★
bolomeer(金币+1): 谢谢参与
1949stone: sure吗？？？ 2013-06-24 08:08:22
对着每个管子哈口气就足够了。
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4楼2013-06-23 19:37:08
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Science298

铜虫 (正式写手)
如果楼主提取RNA是做分子标记或者芯片的话，没有必要在意RNA残留，要晓得RNAase无处不再且超级难以灭火（有兴趣的可以去尝试提取一下RNA），所以个人且以为正常呼吸就足够了。
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5楼2013-06-24 08:41:45
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