24小时热门版块排行榜

>论坛更新日志 (2289)
>导师招生 (812)
>虫友互识 (427)
>休闲灌水 (396)
>招聘信息布告栏 (126)
>论文投稿 (92)
>博后之家 (79)
>文献求助 (57)
>硕博家园 (39)
>教师之家 (35)
>考研 (31)
>学术会议 (30)
>公派出国 (23)
>考博 (20)
>基金申请 (16)
>找工作 (12)

返回列表

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

陈彦利

铁虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 8.9
帖子: 140
在线: 71.4小时
虫号: 2174654

[交流] 基因克隆失败原因，求助！

我们要克隆一个目的基因，结果PCR后电泳根本就没有条带，为什么呀，请高手帮忙分析原因

回复此楼

» 猜你喜欢

HILIC磁珠研究蛋白组学怎么做？已经有0人回复
His标签蛋白纯化怎么才能快？已经有0人回复
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费? 已经有287人回复
WRN变构抑制剂HRO761：从D1/D2界面锁定到MSI合成致死的工具化合物深度解析已经有0人回复
KRAS G12V(ON) 选择性抑制剂 RMC-5127：从三元复合物机制到科研应用已经有0人回复
SHP2 变构抑制剂 Sitneprotafib：从作用机制到科研试剂选型要点已经有0人回复
PRMT5·MTA 抑制剂 MRTX1719 的科研应用已经有0人回复
SW033291 科研使用解析：分子特征、储存与实验获取要点已经有0人回复
泛 RAS 抑制新思路：大环肽拟似物如何同时牵住突变型与野生型 RAS？已经有0人回复
TYK2/JAK1 双靶点工具化合物 Brepocitinib：激酶选择性、研究进展与实验应用全解析已经有0人回复
矢车菊素-3-O-葡萄糖苷质控实录：从一张HPLC图谱读懂纯度与稳定性已经有0人回复

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

长片段基因3.9K克隆不出来，求助已经有43人回复
求助-基因克隆及引物设计的问题已经有6人回复
重金求助基因克隆与功能验证方向中文摘要350字左右翻译成英语急！急！急！在线等已经有3人回复
求助！大片段4kb左右基因PCR克隆方法已经有15人回复
求助-基因克隆有关方面内容已经有8人回复
求助基因克隆视频已经有11人回复
【求助】基因克隆T载体酶切问题等已经有8人回复
【求助/交流】基因克隆，谁能帮帮我。。。已经有8人回复
【求助】求助基因克隆。已经有8人回复
【求助/交流】求助：做基因克隆表达的时候，怎么选基因？已经有7人回复
【求助/交流】加急~~~求助：关于基因克隆与表达引物设计的问题！希望高人指点！已经有3人回复
【求助/交流】基因克隆设计引物已经有7人回复
【求助】求教基因克隆中的引物设计问题【有效期至2010年11月18日】已经有6人回复
基因克隆！求助！~ 已经有4人回复
【求助/交流】大肠杆菌某段基因的克隆问题已经有3人回复
【求助/交流】关于基因克隆写文章的问题已经有9人回复
【求助/交流】基因克隆问题求助！已经有7人回复
【求助/交流】基因克隆实验为非目的片段？已经有27人回复
【求助/交流】目的基因克隆总不成功已经有5人回复
【求助/交流】有关蛋白纯化及其基因克隆的问题！请大家帮助！已经有10人回复
【求助/交流】基因组中克隆启动子已经有7人回复
【求助/交流】求助基因克隆方面的问题解决方案已经有17人回复
【求助/交流】已知基因序列如何克隆获得已经有18人回复
【求助/交流】真菌的基因克隆与表达已经有7人回复

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴

1楼 2013-04-27 14:40:22

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

陈彦利

铁虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 8.9
帖子: 140
在线: 71.4小时
虫号: 2174654

引用回帖:

3楼: Originally posted by 德国工兵铲 at 2013-04-27 14:54:01
体系中模板、引物、dntp、水都有可能有问题，还有镁离子浓度

程序中退火温度也比较重要，你什么都没有给，不好说啊！

　　以反转录得到的双链cDNA为模板，设计特异性引物，Forward primer：5’-GGCATCCATGTCGCATCTGT-3’；Reverse primer :5’-TCTGACCCTATTGAGCCCTCT-3’。通过PCR扩增获得目的基因OspHT7。
取0.5ml PCR管，一次加入下列试剂：
反应体系          25uL
Tamplate cDNA    0.75uL
ddH2O             16.5uL
10×PCR Buffer    2.5uL
Mg2+             1uL
dNTP             2uL
primer  Forward    1uL
   Reverse    1uL
Taq                0.25uL

设定PCR程序：
PCR循环:
94℃ 预变性5min
94℃ 60s
55℃ 60s 30个循环
72℃ 90s
72℃ 10min
4℃ 保存。
电泳鉴定：采用1%的琼脂糖凝胶电泳进行分析，其中电泳加样体积均为10uLDNAMarker为D2000。紫外灯下观察结果。
　　拍照观察：采用凝胶图像分析系统，对电泳图条带进行拍照分析。