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基因克隆失败原因，求助！
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| 我们要克隆一个目的基因，结果PCR后电泳根本就没有条带，为什么呀，请高手帮忙分析原因 |
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4楼2013-04-27 15:11:25
2楼2013-04-27 14:50:06
3楼2013-04-27 14:54:01
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以反转录得到的双链cDNA为模板，设计特异性引物，Forward primer：5’-GGCATCCATGTCGCATCTGT-3’；Reverse primer :5’-TCTGACCCTATTGAGCCCTCT-3’。通过PCR扩增获得目的基因OspHT7。 取0.5ml PCR管，一次加入下列试剂： 反应体系 25uL Tamplate cDNA 0.75uL ddH2O 16.5uL 10×PCR Buffer 2.5uL Mg2+ 1uL dNTP 2uL primer Forward 1uL Reverse 1uL Taq 0.25uL 设定PCR程序： PCR循环: 94℃ 预变性5min 94℃ 60s 55℃ 60s 30个循环 72℃ 90s 72℃ 10min 4℃ 保存。 电泳鉴定：采用1%的琼脂糖凝胶电泳进行分析，其中电泳加样体积均为10uLDNAMarker为D2000。紫外灯下观察结果。 拍照观察：采用凝胶图像分析系统，对电泳图条带进行拍照分析。 |
5楼2013-04-27 15:13:06
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