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汕头大学海洋科学接受调剂
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转基因猴子

木虫 (正式写手)

[求助] PCR产物双酶切遇到问题,求救!!!

各位虫友们
我在做完PCR之后检测得到目的条带,经过切胶回收后检测条带很亮,之后用BamH1和Xho1进行双酶切,发现什么都没有了,条带貌似是没有跑过,什么都没有哇。
为了检验问题,我将空pET28a载体分别用BamH1和Xho1进行单酶切,都能切动。
我用的是PRIME STAR PREMIX进行的PCR。
酶切体系是:
总:30μl
ddH2O:11
10*K:3
片段:15
BamH1/Xho1:0.5/0.5
我使用的酶切条件是,37℃1.5h。
请问各位虫友,这是怎么回事?是PCR片段的问题吗?

[ Last edited by 转基因猴子 on 2013-3-15 at 15:25 ]
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我还年轻,我要上路!
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linhehu

铜虫 (小有名气)

看不懂你的问题呢
在知识的海洋里裸泳
6楼2013-06-11 19:28:34
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查看全部 8 个回答

cfr1990

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
转基因猴子: 金币+3 2013-03-15 21:18:30
跑胶时间控制在20分钟试试看
2楼2013-03-15 16:27:28
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etralf

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
转基因猴子: 金币+3 2013-03-15 21:18:33
PCR后目的条带用taq加A,然后再练到t载体上,这样再试试,既方便测序,有方便了以后操作
3楼2013-03-15 19:33:30
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转基因猴子

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cfr1990 at 2013-03-15 16:27:28
跑胶时间控制在20分钟试试看

跑胶我用90V25MIN
我还年轻,我要上路!
4楼2013-03-15 19:58:49
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