| 查看: 2181 | 回复: 7 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
转基因猴子木虫 (正式写手)
|
[求助]
PCR产物双酶切遇到问题，求救！！！
|
||
|
各位虫友们 我在做完PCR之后检测得到目的条带，经过切胶回收后检测条带很亮，之后用BamH1和Xho1进行双酶切，发现什么都没有了，条带貌似是没有跑过，什么都没有哇。 为了检验问题，我将空pET28a载体分别用BamH1和Xho1进行单酶切，都能切动。 我用的是PRIME STAR PREMIX进行的PCR。 酶切体系是： 总：30μl ddH2O：11 10*K：3 片段：15 BamH1/Xho1：0.5/0.5 我使用的酶切条件是，37℃1.5h。 请问各位虫友，这是怎么回事？是PCR片段的问题吗？ [ Last edited by 转基因猴子 on 2013-3-15 at 15:25 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松
已经有0人回复
-
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有295人回复
-
利瑞鲁单抗：靶向KIR的NK细胞检查点工具抗体，结构基础与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 测序正确的片段双酶切连接表达载体，提质粒PCR验证后，还需要再次测序吗？
已经有11人回复
- PCR产物酶切回收奇特现象
已经有5人回复
- 易错PCR酶切与连接
已经有23人回复
- PBI121载体与目的片段连接后双酶切问题
已经有23人回复
- 质粒，PCR产物双酶切后胶回收不回来？求大神指导！
已经有49人回复
- fermentas双酶切体系
已经有5人回复
- pet32a双酶切之后，电泳条带找不到
已经有10人回复
- 求助：酶切下来的片段比PCR片段大100多bp是怎么回事，怎么解决这个问题。
已经有4人回复
- 关于双酶切和通用buffer的问题
已经有4人回复
- 关于测序的问题-双酶切和PCR验证均是对的 但是测序后有重叠现象
已经有8人回复
- PCR产物及PCR胶回收产物的存放问题
已经有8人回复
- 双酶切问题，跪求指导啊
已经有5人回复
- 怎么预期酶切产物的大小？
已经有8人回复
- Sac1和Xho1的双酶切连接
已经有5人回复
- PCR产物跑胶结果
已经有11人回复
- 我用sal Ⅰ和xho Ⅰ双酶切链接目的基因，菌落pcr能p出目的条带，但酶切切不开。
已经有18人回复
- 纠结的分子实验，双酶切连不上，求助
已经有14人回复
- 载体双酶切后，胶回收的效率极低，胶回收试剂盒正常，双酶切后的电泳图也正常，
已经有13人回复
- 求助--双酶切连接构质粒
已经有15人回复
- 酶切产物能直接做连接反应吗
已经有5人回复
- 跪求大神指点PCR产物浓度分析
已经有12人回复
- 双酶切，连接，转化问题
已经有30人回复
- 同尾酶酶切及连接
已经有6人回复
- PCR ， 双酶切，连接问题
已经有17人回复
- 【求助/交流】双酶切PCR产物的时间
已经有7人回复
西瓜
荣誉版主 (知名作家)
- MolEPI: 50
- 应助: 94 (初中生)
- 贵宾: 3.157
- 金币: 1849.6
- 散金: 11458
- 红花: 116
- 沙发: 21
- 帖子: 7553
- 在线: 1449.5小时
- 虫号: 271749
- 注册: 2006-08-13
- 性别: GG
- 专业: 细胞衰老
- 管辖: 分子生物
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
转基因猴子: 金币+14, ★★★★★最佳答案, 谢谢西瓜，我换个试剂盒试试 2013-03-15 21:18:22
gyesang: 金币+2, 欢迎老版主经常回来为虫子排忧解难！ 2013-03-16 00:35:26
感谢参与，应助指数 +1
转基因猴子: 金币+14, ★★★★★最佳答案, 谢谢西瓜，我换个试剂盒试试 2013-03-15 21:18:22
gyesang: 金币+2, 欢迎老版主经常回来为虫子排忧解难！ 2013-03-16 00:35:26
|
最近我也碰到了类似的情况，胶回收的产物酶切之后什么都没有了。逐一检查了内切酶、内切酶buffer、水，各种纠结，最后发现是胶回收产物的问题：只加水，在37度下放一两个小时就会降解，如果加了内切酶的buffer，降解得更快。我估计是污染了DNA酶，毕竟DNA酶在内切酶buffer中的活性比在纯水中更高，这也能解释为什么加了buffer降解得更快。 当时着急用，用PCR产物纯化试剂盒再次纯化一次，虽然剩下的东西少得可怜，好歹酶切正常了。 后来问了实验室其他人，他们最近做胶回收的得率也很低，估计是那个试剂盒污染了，后面换了个新的试剂盒就没问题了。 |
5楼2013-03-15 21:07:01
cfr1990
金虫 (正式写手)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 1114.3
- 红花: 7
- 帖子: 418
- 在线: 124.3小时
- 虫号: 2127192
- 注册: 2012-11-14
- 性别: GG
- 专业: 发育生物学
2楼2013-03-15 16:27:28
3楼2013-03-15 19:33:30
转基因猴子
木虫 (正式写手)
- 应助: 15 (小学生)
- 金币: 3791.5
- 散金: 29
- 红花: 4
- 帖子: 784
- 在线: 277.7小时
- 虫号: 450786
- 注册: 2007-11-04
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
4楼2013-03-15 19:58:49
